产品详情
果糖-1,6-二磷酸(FDP)含量检测试剂盒说明书
微量法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
规格:100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂二:临用前加入 0.3mL 蒸馏水,充分溶解后待用,用不完的试剂 4℃保存,4℃保存一周;
2、 标准品:临用前加入 1176 μL 蒸馏水充分溶解,配制成 50 μmol/mL 果糖-1,6-二磷酸标准溶液。
产品说明:
果糖 1,6-二磷酸(fructose-1,6-diphosphate, FDP)是糖酵解过程中的一种重要的中间产物,对多种酶具有调节作用,具有改善细胞能量代谢、增加能量利用、抗心律失常及抗组织过氧化等作用,广泛应用于临床医药。
醛缩酶催化果糖 1,6-二磷酸裂解,产物与 2,4-二硝基苯肼在酸性介质中反应生成 2,4-二硝基苯腙,在碱性溶液中呈红棕色,在 540nm 处有特征吸收峰。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、低温台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP管。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1. 组织:按照质量(g):提取液一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液一)加入提取液一,冰浴匀浆后于4℃,12000g离心10min,取0.8mL上清液,再加入0.16mL提取液二,4℃,12000g离心10min后取上清待测。
2. 细胞:按照细胞数量(104个):提取液一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液一)加入提取液一,冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);于4℃,12000g离心10min,取0.8mL上清液,再加入0.16mL提取液二,4℃,12000g离心10min后取上清待测。
3. 血清(浆):取100μL血清(浆)加入1mL提取液一,4℃,12000g离心10min,取0.8mL上清液,再加入0.16mL提取液二,4℃,12000g离心10min后取上清待测。
二、测定步骤
1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。
2、 将50μmol/mL的果糖-1,6-二磷酸标准液用蒸馏水倍比稀释为3.125、1.5625、0.78125、0.39、0.2、0.1 μmol/mL的标准溶液备用。
3、 样本测定:(在1.5 mL离心管或96孔板中操作)
三、FDA 含量计算
注意事项:
当ΔA测定大于0.5时,建议将样本用蒸馏水稀释后再进行测定,计算公式中乘以稀释倍数。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!