产品详情
酰基转移酶(AAT)活性检测试剂盒说明书
微量法
规格:100T/96S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 提取液:内含不溶物,使用前摇匀。
2、 试剂二:临用前加蒸馏水 1 mL 充分溶解,4℃保存。
3、 试剂四:临用前加入试剂一 1 mL 充分溶解,4℃避光保存。
产品说明:
AAT是一个多功能蛋白大家族,主要负责催化生物体内各种酰基化和去酰基化反应,在基因表达、代谢和信号传导中具有重要作用。AAT催化乙酰CoA转移乙酰基到丁醇,同时还原DTNB生成TNB;TNB在412nm有吸收峰,测定412 nm吸光度增加速率,来计算AAT活性。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
组织样本:称取约 0.1g 样本加提取液 1mL,冰上充分研磨,15000g 4℃离心 20min,上清液待测。
血清(浆)样本:直接检测。
二、测定步骤
1、 分光光度计/酶标仪预热30min 以上,调节波长至412nm,蒸馏水调零。
2、 试剂一在37℃水浴保温20 min以上。
3、 样本测定:
三、AAT活性计算
注意事项:
1、 上清液蛋白质含量需要另外测定。
2、 当吸光值大于1时,建议稀释后测量。
3、 建议一个一个样本测定,一人比色一人计时。
4、 如果ΔA测偏低,可以延长反应时间,如测定10 s和310 s的吸光度,相应修改计算公式中反应时间。
实验实例:
1、 取0.1g肾脏加入1mL提取液进行样本处理,取上清后稀释4倍后按测定步骤操作,用微量石英比色皿测得ΔA空=A2空 -A1空 =0.0849-0.08=0.0049、 ΔA测 =A2测 -A1测 =0.69-0.4929=0.1971、 ΔA=ΔA测 -ΔA空 =0.1971-0.0049=0.1922,按样本质量计算酶活得:
AAT (U/g 质量) =5000×ΔA÷W×4(稀释倍数)=38440 U/g 质量。
2、 取兔血清直接按照测定步骤操作,测得ΔA空=A2空-A1空=0.0849-0.08=0.0049、ΔA测=A2测-A1测0.629-0.5342=0.0948、ΔA=ΔA测-ΔA空=0.0948-0.0049=0.0899,按血清体积计算酶活得:
AAT (U/mL 血清) =5000×ΔA=5000×0.0899=449.5 U/mL 血清。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!