产品详情
脂蛋白酯酶(LPL)活性检测试剂盒说明书
微量法
规格:100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、试剂二:临用前加入 1 mL 丙酮溶解备用;
2、标准品:5 μmol/mL 对硝基苯酚标准溶液。
产品说明:
脂蛋白酯酶(Lipoproteinlipase,LPL)是甘油三酯降解的降速酶,可催化甘油三酯水解为脂肪酸和单酸甘油酯,主要在肝脏实质细胞中合成,在脂质代谢和转运中发挥重要作用。
脂蛋白酯酶水解4-硝基苯棕榈酸酯产生4-硝基苯酚,在400nm有特征吸收峰。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、低温台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管、冰、丙酮和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);10000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
3、血清(浆)样本:直接检测。
二、测定步骤
1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至400nm,蒸馏水调零。
2、 将5μmol/mL标准液用试剂一稀释16倍至0.3125μmol/mL的标准溶液备用。
3、 操作表:在1.5mL EP管中进行下列操作:
三、LPL活性计算
注意事项:
1、 测定管加入试剂二后混变浑浊为正常现象。
2、 若A大于2,将粗酶液用试剂一稀释后再进行测定。
实验实例:
1、 取0.1g大鼠肌肉加入1mL试剂一,取上清后按照测定步骤操作,用96孔板测得计算ΔA=A测定管- A对照管=0.367-0.128=0.239,ΔA标准=A标准管-A空白管=0.378-0.046=0.332,按样本质量计算酶活得:
LPL(U/g 质量)= 31.25×ΔA÷ΔA标准÷W=31.25×0.239÷0.332÷0.1=224.96 U/g 质量。
2、 取兔血清直接按照测定步骤操作,用96孔板测得计算ΔA=A测定管- A对照管=0.750-0.152=0.598,ΔA标准=A标准管-A空白管=0.378-0.046=0.332,按血清(浆)体积计算酶活得:
LPL(U/mL)=31.25×ΔA÷ΔA标准=31.25×0.598÷0.332=56.29 U/mL。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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