产品详情
β-半乳糖苷酶(β-GAL)活性检测试剂盒说明书
微量法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
规格:100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、试剂一:临用取 1 支加入 1.25mL 蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂-20℃分装保存 4 周,避免反复冻融(1 瓶粉剂溶解后可做 100T,为了延长使用时间,此产品多给 1 瓶粉剂)。
2、标准品:5μmol/mL 的对硝基苯酚溶液。
产品说明:
β-GAL(EC 3.2.1.23)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,能够催化β-半乳糖苷化合物中β-半乳糖苷键水解,此外还具有转半乳糖苷的作用。β-GAL不仅可为植物的快速生长释放储存的能量,还能在正常的多糖代谢、细胞壁组分代谢以及衰老时细胞壁降解过程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖残基的水解,释放自由的半乳糖。
β-GAL分解对-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基苯酚,后者在400nm有最 大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算β-GAL活性。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、超声破碎仪、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、细菌或培养细胞的处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3 秒,间隔 10 秒,重复 30 次),15000g,4℃,离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、组织的处理:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆;15000g,4℃,离心 10min,取上清,置冰上待测。
二、测定步骤
1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至400nm,分光光度计蒸馏水调零。
2、 标准溶液的稀释:用蒸馏水将标准液稀释至 200、100、50、25、12.5、6.25、0nmol/mL 标准溶液待测。
3、 标准液稀释可参考下表:
4、 样本测定(在EP管或96孔板中依次加入下列试剂):
三、β-GAL活性计算
注意事项:
提取液中含有使蛋白变性的成分,故按蛋白浓度计算时需要重新提取蛋白进行测定。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!