产品详情
多聚半乳糖醛酸酶(PG)活性检测试剂盒说明书
微量法
规格:100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂一:若溶液中有晶体析出,37℃水浴溶解;
2、 试剂二:临用前加入 10 mL 蒸馏水,60℃水浴助溶;
3、 标准品:10mg 半乳糖醛酸。临用前加入 0.943 mL 蒸馏水,配成 50 μmol/mL 的标准液;
产品说明:
多聚半乳糖醛酸酶(Ploygalacturonase,PG)属果胶酶的一种,广泛存在于植物、细菌及真菌中。其催化多聚半乳糖醛酸分解,在果实软化、花粉授粉、种子发育成熟及器官脱落等方面具有重要作用,并且病原菌在侵染宿主植物时,可分泌多聚半乳糖醛酸酶来降解宿主细胞壁,进而导致病程发展。
PG水解多聚半乳糖醛酸生成半乳糖醛酸,半乳糖醛酸与DNS试剂反应生成在540 nm有特征吸收峰的棕红色物质,测定540 nm处吸光值变化可计算得果胶酶活性。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、低温台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为1 : 5~10的比例(建议称取约0.1 g,加入1 mL提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于4℃,16000 g,离心10 min,取上清置于冰上待测。
细菌:先收集细菌到离心管内,离心后弃上清;按照细菌数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000︰1的比例(建议500万个细菌加入1 mL提取液),冰浴超声波破碎细菌(功率20%或200 W,超声3 s,间隔7 s,总时间5 min);然后4℃,16000 g,离心10 min取上清置于冰上待测。
液体:直接检测或用提取液稀释后检测。
二、测定步骤
1. 分光光度计/酶标仪预热30 min以上,调节波长至540 nm,蒸馏水调零。
2. 将50 μmol/mL 标准液用蒸馏水稀释为6、5、4、3、2、1.5 μmol/mL的标准溶液备用。
3. 操作表:(在1.5mL离心管中)
三、PG酶活计算
注意事项:
1、 样本提取上清液置于冰上待测,且样本提取完成后建议当天提取当天内测完。
2、 当 A 大于 2 时,建议将样本用提取液稀释后再进行测定,并在计算公式中乘以相应稀释倍数。
3、 植物果实组织建议将样本稀释 10 倍或 20 倍后再测定。
4、 若样本 ΔA 值偏小,建议延长酶促反应时间,并在计算公式中除以相应时间。
实验实例:
1、 取 0.1g 木槿花加入 1mL 提取液冰浴匀浆后于 4℃,16000 g,离心 10 min,取上清稀释 2 倍后按照测定步骤操作,用微量石英玻璃比色皿测得计算 ΔA=A 测定管-A 对照管=1.6843-1.4916=0.1927,带入标准曲线 y=0.2426x0.2979,计算得 x=2.022μmol/mL,按样本质量算:
PG 酶活(U/g 质量)= 0.5x÷W×2(稀释倍数)=20.22 U/g 质量。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!