产品详情
总糖含量检测试剂盒说明书
微量法
规格:100T/96S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1.标准品:10 mg 无水葡萄糖。临用前加 1 mL 蒸馏水溶解为 10 mg/mL 的葡萄糖标准品备用,2-8℃保存两周。
产品说明:
糖类物质是构成植物体的重要成分之一,也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。总糖主要指具有还原性的葡萄糖,果糖,戊糖,乳糖和在测定条件下能水解为还原性的单糖的蔗糖,麦芽糖以及可能部分水解的淀粉。总糖酸水解为还原糖,还原糖在碱性条件下与DNS试剂共热后被还原成氨基化合物,在碱性溶液中呈红棕色,还原糖的量与桔红色物质颜色的深浅成正比关系,以此测定样本中的总糖含量。
技术指标:
最 低检出限:0.0667 mg/mL
线性范围:0.09-1.8 mg/mL
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、组织样本的处理:称取约 0.1g 样本于 10mL EP 管中,加入 1mL 试剂一,1.5mL 蒸馏水,研磨匀浆,沸水浴 30min,加入 1mL 试剂二,涡旋混匀,用蒸馏水定容至 10mL,8000g,25℃离心 10min,取上清液待测。(注意稀释,见注意事项)
2、血清(浆)、液体样本的处理:取 0.1mL 血清(浆)于 1mLEP 管中,加入 0.1mL 试剂一,0.15mL 蒸馏水,匀浆,沸水浴 30min,加入 0.1mL 试剂二,涡旋混匀,用蒸馏水定容至 1mL,8000g,25℃离心 10min,取上清液待测。(注意稀释,见注意事项)
二、测定步骤
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 540nm,分光光度计用蒸馏水调零。
2、标准品准备:将标准品用蒸馏水稀释至 1.6、1.0、0.8、0.4、0.2、0.1mg/mL,标准液稀释可参考下表:
3、加样表:
三、总糖含量计算
注意事项:
1、如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。注意同步修改计算公式。
2、此试剂盒对于纤维素的分解程度无法达到 100 %。
实验实例:
1、 取 0.1g 兔子肝脏进行样本处理,取上清,按照测定步骤操作,用 96 孔板测得计算 ΔA 测定=A 测定管-A 空白管=0.599-0.05=0.549,标准曲线 y=0.8881x-0.0561,则 x=0.6813,按样本质量计算含量得:
总糖(mg/g 质量)=10×x÷W=68.13 mg/g 质量。
2、 取 0.1g 迎春进行样本处理,取上清,按照测定步骤操作,用 96 孔板测得计算 ΔA 测定=A 测定管-A 空白管=0.594-0.05=0.544,标准曲线 y=0.8881x-0.0561,则 x=0.6575,按样本质量计算含量得:
总糖(mg/g 质量)=10×x÷W=65.75 mg/g 质量。
3、 取小鼠血清进行处理,取上清,按照测定步骤操作,用 96 孔板测得计算 ΔA 测定=A 测定管-A 空白管=0.294-0.05=0.244,标准曲线 y=0.8881x-0.0561,则 x=0.338,按血清体积计算含量得:
总糖(mg/mL)=10×x=3.38 mg/mL。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!