产品详情
土壤 α-葡萄糖苷酶(S-α-GC)活性检测试剂盒说明书
微量法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
规格:100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂一:自备甲苯,2-8℃保存;
2、 试剂二:临用前取 1 瓶加入 5 mL 蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂-20℃分装保存 4 周;
3、 标准品:5 mmol/L 的对硝基苯酚溶液。
产品说明:
S-α-GC能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键生成葡萄糖,是纤维素分解酶系中重要组成成分之一,在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要生理功能。
S-α-GC能够催化对-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚,后者在400nm有特征光吸收。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、恒温培养箱/水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、30-50目筛、研钵、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可参考文献)
新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干,过 30-50 目筛。
二、测定步骤
1、 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至340nm,分光光度计蒸馏水调零。
2、 标准品:取20μL 5mmol/L的对硝基苯酚溶液,加入980μL蒸馏水,充分混匀,配制成100μmol/L标准液使用,现用现配。(实验中每管需要100μL,为减小实验误差,故配制大体积。)
3、 加样表:
三、S-α-GC 活力计算
注意事项:
若ΔA<0.01,可延长37℃水浴时间;若ΔA>1.5,可将上清液稀释后进行测定;最 后计算时注意各个因素的改变。
实验实例:
1、 取两管 0.02g 三叶草土,即为测定管和对照管,按照测定步骤操作,用 96 孔板测得计算 ΔA=A 测定管-A 对照管=0.421-0.238=0.183,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管=0.473-0.047=0.426,计算酶活得:
S-α-GC 活力(U/g 土样)=0.444×ΔA÷ΔA 标准÷W=0.444×0.183÷ 0.426÷0.02=9.5366 U/g 土样。
2、 取两管 0.02g 林土样,即为测定管和对照管,按照测定步骤操作,用 96 孔板测得计算 ΔA=A 测定管-A 对照管=0.374-0.225=0.149,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管=0.473-0.047=0.426,计算酶活得:
S-α-GC 活力(U/g 土样)=0.444×ΔA÷ΔA 标准÷W=0.444×0.149÷ 0.426÷0.02=7.7648 U/g 土样。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!