产品详情
结合态淀粉合成酶(GBSS)活性检测试剂盒说明书
微量法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
规格:100T/96S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂四:临用前每支加入 5 mL 试剂一。
2、 试剂五:临用前每支加入 10 mL 试剂一。
3、 试剂六:临用前取 1 支加入 208 μL 双蒸水,充分溶解备用,用不完的试剂 4℃保存。
4、 试剂八:每支临用前加入溶解好的 4 mL 试剂四。
1、 反应液Ⅰ的配制:临用前在试剂二中加入 14 mL 试剂一,缓慢加热,逐渐升温至水沸腾使其溶解,冷却后加入试剂三混合溶解,这样可以分两批配制并且测定。
产品说明:
GBSS(EC 2.4.1.21)以束缚态存在于淀粉体中,催化淀粉链的加长反应,主要负责直链淀粉的合成。
GBSS催化ADPG与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上,同时生成ADP;进一步通过反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化NADP+还原为NADPH,其中NADPH生成量与前一步反应生成的ADP数量呈正比,通过340nm下测定NADPH的增加量,可以计算GBSS活性。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
称取约 0.1g 组织加入 1mL 提取液,冰浴中匀浆。10000g ,4℃离心 10min,弃上清,在沉淀中加入 1mL 提取液充分混匀,置冰上待测。
二、测定步骤
1、 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
2、 在EP管中按顺序加入下列试剂
注意:试剂二如有沉淀,加入之前要使之充分溶解混匀。
三、GBSS活性计算
实验实例:
1. 取 0.1g 肝脏加入 1mL 提取液,冰浴中匀浆。10000g,4℃离心 10min,弃上清,在沉淀中加入 1mL 提取液充分混匀,置冰上,之后按照测定步骤操作,用微量石英比色皿测得计算 ΔA=A2-A1=0.2685-0.2532=0.0153,按样本质量计算酶活得:
GBSS 活性(U/g 质量)=43.2×ΔA÷W=6.6096 U/g 质量。
2. 取 0.1g 柳树加入 1mL 提取液,冰浴中匀浆。10000g,4℃离心 10min,弃上清,在沉淀中加入 1mL 提取液充分混匀,置冰上,之后按照测定步骤操作,用微量石英比色皿测得计算 ΔA=A2-A1=2.2252-2.2184=0.0068,按样本质量计算酶活得:
GBSS 活性(U/g 质量)=43.2×ΔA÷W=2.9376 U/g 质量。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!