产品详情
过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒说明书
微量法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
规格:100T/96S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂二:液体置于试剂瓶内 EP 管中,使用前需先离心。
2、 检测工作液的配制:
A. 使用 96 孔 UV 板:取试剂二 25 μL 中加入 5mL 试剂一,充分混匀,作为工作液(约 26T),现用现配;也可根据样本量按比例配制(提供 1 个 15 mL 空瓶)。
B. 使用微量石英比色皿:取试剂二 25 μL 中加入 6.5mL 试剂一,充分混匀,作为工作液(约 34T),现用现配;也可根据样本量按比例配制(提供 1 个 15 mL 空瓶)。
产品说明:
CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是最主要的H2O2清除酶,在活性氧清除系统中具有重要作用。.
H2O2在240nm下有特征吸收峰,CAT能够分解H2O2,使反应溶液240nm下的吸光度随反应时间而下降,根据吸光度的变化率可计算出CAT活性。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、细菌、细胞或组织样本的制备:
a、细菌或培养细胞:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
b、组织:按照组织质量(g):称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样本:直接检测。
二、测定步骤
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 240nm,蒸馏水调零。
2、 测定前将 CAT 检测工作液在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 10min 以上。
3、在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本和 190μL 工作液,立即混匀并计时,记录 240nm 下初始吸光值 A1和 1min 后的吸光值 A2。计算 ΔA=A1-A2。
三、CAT 活性计算
注意事项:
如果反应液有大量气泡产生,将样本用蒸馏水稀释后再进行测定。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!