产品详情
水土中总磷酸盐含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
规格:50T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂一:浓硫酸 10 mL 自备。
2、 试剂二:每瓶临用前加入 15 mL 蒸馏水溶解备用,溶解后 2-8℃保存一周。
3、 试剂四:临用前加入 10 mL 蒸馏水,溶解后 2-8℃保存两周。
4、 试剂五:临用前加入 10 mL 蒸馏水,溶解后 2-8℃保存两周。
5、 标准品:临用前加入 1.4 mL 下述稀释液溶解粉剂,配成 20μmol/mL 的磷标准液,2-8℃保存两周。
6、 稀释液的配制:按蒸馏水体积(mL):试剂一体积(mL):试剂二体积(mL)=10:1:2 的比例混合即可,现用现配。
7、 定磷试剂的配制:按 H2O:试剂四:试剂五:试剂六(V:V:V:V)=2:1:1:1 的比例配制,配好的工作液应为浅黄色。若变色则试剂失效,若是蓝色则为磷污染,工作液应现配现用。
注意:配试剂最 好用新的烧杯、玻璃棒和玻璃移液器,也可以用一次性塑料器皿,避免磷污染。
产品说明:
总磷酸盐包含正磷酸盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、多聚磷酸盐等各种磷酸盐的形式,反应了水土中的磷酸盐水平,是一个水质和土壤质量评价的重要指标。
在酸性溶液中,在分解剂和高温条件下,将无机磷酸盐和有机磷酸盐水解成正磷酸盐,正磷酸盐可与钼酸铵反应成磷钼酸,在还原剂存在时被还原为磷钼蓝,在660nm处有特征吸收峰。
技术指标:
最 低检出限:0.0065 μmol/mL
线性范围:0.0098-1.25 μmol/mL
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、天平、台式离心机、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、30-50目筛、漩涡震荡仪、研钵、EP管、蒸馏水、浓硫酸。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1. 水样:按照水样体积(mL):试剂一体积(mL):试剂二体积(mL)为 10:1:2 的比例(建议取 1mL 水样,加入 100μL 试剂一和 200μL 试剂二),用封口膜封口。95℃水浴 30min,冷却后待测。
2. 土样:(1)新鲜土样风干,过 30-50 目筛;(2)按照风干土壤质量(g):蒸馏水体积(mL):试剂一体积(mL):试剂二体积(mL)=1:10:1:2(建议称取约 0.1g 土样,加入 1mL 蒸馏水,再加入 100μL 试剂一和 200μL 试剂二),用封口膜封口。95℃水浴振荡 30min,10000g,25℃离心 10min,取上清液待测。
二、测定步骤
1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至660nm,蒸馏水调零。
2、 将20μmol/mL标准液用稀释液稀释为1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078125、0.039、0.02μmol/mL的标准溶液备用。
3、 标准溶液稀释表:
4、 操作表 (在1.5mL离心管中依次加入下列试剂) :
三、总磷酸盐含量计算
1、标准曲线的绘制:
以各个标准溶液的浓度为x轴,其对应的ΔA标准为y轴,绘制标准曲线,得到标准方程y=kx+b,将ΔA带入方程得到x(μmol/mL)。
2、总磷酸盐含量的计算:
土样总磷酸盐含量(μmol/g 土样)=x×V样÷(V样×W÷V样总)=1.3x÷W
水样总磷酸盐含量(μmol/mL 水样)=x×V样总÷V水样=1.3x
V样:加入样本体积,0.1mL;V样总:样本处理加到土样中的液体总体积,1.3mL;W:样本质量,g;V水样:水样体积,1mL。
注意事项:
1、定磷试剂应现配现用,正常颜色为浅黄色,如有变色或变蓝则均为失效。
2、加入试剂三后可能会产生絮状沉淀,其对后续实验无影响,加入定磷试剂后即自行消除。
3、如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
实验实例:
1、 取 0.1g 三叶草土,加入 1mL 蒸馏水,再加入 100μL 试剂一和 200μL 试剂二,离心取上清稀释 2 倍,之后按照测定步骤操作,计算ΔA 测定=A 测定管-A 空白管=1.162-0.006=1.156,带入标准曲线 y=0.8377x+0.0055,得x=1.3734,计算含量得:
土样总磷酸盐含量(μmol/g 土样)=1.3x÷W×2(稀释倍数)=1.3×1.3734÷0.1×2=35.71 μmol/g 土样。
2、 取 0.1g 林土,加入 1mL 蒸馏水,再加入 100μL 试剂一和 200μL 试剂二,离心取上清稀释 2 倍,之后按照测定步骤操作,计算ΔA 测定=A 测定管-A 空白管=1.087-0.006=1.081,带入标准曲线 y=0.8377x+0.0055,得x=1.2839,计算含量得
土样总磷酸盐含量(μmol/g 土样)=1.3x÷W×2(稀释倍数)=1.3×1.2839÷0.1×2=33.38 μmol/g 土样。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!