产品详情
外切 β-1,4-葡聚糖酶/纤维二糖水解酶(C1)活性检测试剂盒说明书
微量法
规格:100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂一:临用前取 1 瓶加入 3 mL 蒸馏水溶解备用,现用现配;2-8℃保存 4 周;
2、 标准品:5 μmol/mL 对硝基苯酚溶液。
产品说明:
β-1,4-葡聚糖酶/纤维二糖水解酶(C1,EC3.2.1.91)存在于细菌、真菌和动物体内,是微生物纤维素降解酶系的主要组分,也是水解天然纤维素的必需组分,C1 酶作用于纤维素线状分子的末端,水解 β-葡萄糖苷键,每次切下 1 个纤维二糖分子。
C1 能够催化对硝基苯纤维二糖苷 (PNPC)生成对硝基苯酚,后者在 400 nm 有特征光吸收。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP 管。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、组织:按照组织质量(g): 提取液体积(mL)为 1 : 5~10 的比例(建议称取 0.1 g 组织,加入 1 mL 提取液)进行冰浴匀浆。10000g,4℃离心 10 min,取上清置冰上待测。
2、细菌、真菌:按照细菌或真菌数量 104个 : 提取液体积(mL)500~1000 : 1 的比例(建议 500 万细菌或真菌加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 200W,超声 3 s,间隔 7s,总时间 3min)然后 10000g,4℃,离心 10 min,取上清置冰上待测。
3、血清(浆)等液体:直接测定。
二、测定步骤
1、 分光光度计/酶标仪预热 30 min 以上,调节波长至 400 nm,分光光度计蒸馏水调零。
2、 标准溶液的稀释:取 50μL 5 μmol/mL 对硝基苯酚溶液,加入 750μL 蒸馏水,充分混匀,配制成 0.3125 μmol/mL标准液使用,现用现配。(实验中每管需要 20μL,为减小实验误差,故配制大体积。)
3、 操作表(在 1.5 mL 离心管中依次加入下列试剂):
三、C1 酶活计算
注意事项:
1、若吸光度大于 1.5 时,建议将样本用提取液稀释后进行测定。计算公式乘以稀释倍数。
实验实例:
1、 取 0.1g 香菇进行样本处理,离心取上清稀释 2 倍后按照测定步骤操作,测得计算 ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=1.454-0.047=1.407,ΔA 标准=A 标准管-A 空白管=0.292-0.047=0.245,根据样本质量计算酶活得:
C1(U/g 质量)=312.5×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W×2(稀释倍数)=312.5×1.407÷0.245÷0.1×2=35893 U/g 质量。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!