产品详情
D-木糖含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
规格:50T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂一的配制:临用前取一瓶试剂一 A 加入 20mL 试剂一 B,溶解后备用,2-8℃保存一周,若试剂变黄色则已经变质,不能继续使用。
2、 标准品:10mg 木糖。临用前加入 1 mL 蒸馏水配制成 10mg/mL 木糖标准溶液备用。
产品说明:
木糖是一种戊糖。天然D-木糖是以多糖的形态存在于植物中。木糖可以活化人体肠道内的双岐杆菌并促其生长,双歧杆菌是益菌,该菌越多越有益人体健康,食用木糖能改善人体的微生物环境,提高机体的免疫能力;同时木糖在小肠上段吸收后不参与体内的代谢,经肾脏排出。因此,D-木糖的吸收一直作为小肠吸收不良的重要功能指标。
D-木糖在强酸条件下水解产生糠醛,糠醛可与间苯三酚反应生成粉红色化合物,在554 nm处有特殊吸收峰,据此可由吸光值计算出样本中木糖的含量。
技术指标:
最 低检出限:0.0007 mg/mL
线性范围:0.0039-0.4 mg/mL
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、鼓风烘箱、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、30-50目筛、EP管、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、植物样本:将供试的植物样本在65℃的鼓风烘箱中烘干,研磨成粉状,过30-50目筛。按质量(g):提取液体积(mL)1 : 50~100比例(建议称取20mg烘干样本,加入1.0 mL提取液),涡旋混匀,在100℃水浴锅中准确水解2 h。然后10000 rpm,室温离心15 min,弃沉淀,取上清液待测。
2、组织样本:按质量(g):提取液体积(mL)1 : 5~10比例(建议称取0.1g样本,加入1.0 mL提取液),研磨匀浆后,在100℃水浴锅中准确水解2 h,然后于10000 rpm,室温离心15 min,弃沉淀,取上清液待测。
3、血清(浆)等液体样本:直接测定。
二、测定步骤
1、 分光光度计预热30 min以上,调节波长至554 nm,蒸馏水调零。
2、 标准液的稀释:将标准品用蒸馏水稀释至0.4、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078mg/mL的标准溶液备用。
3、 标准液稀释可参考下表:
4、 操作表(在1.5mL EP管中操作):
三、D-木糖含量的计算
1、标准曲线的绘制:
根据标准管的浓度(x,mg/mL)和吸光度ΔA标准(y,ΔA标准),建立标准曲线。根据标准曲线,将ΔA测
定(y,ΔA测定)带入公式计算样本浓度(x,mg/mL)。
2、D-木糖含量的计算:
(1)植物中木糖含量(mg/g)=x×V提取÷W1=x÷W1
(2)组织中木糖含量(mg/g)=x×V提取÷W2= x÷W2
(3)血清(浆)木糖含量(mg/mL)= x×V样÷V样=x
V样:加入样本体积,0.2 mL;V提取:加入提取液的体积,1 mL;W1:植物样本的质量,g;W2:组织样本的质量,g。
注意事项:
1、如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
2、试剂一B因有强烈刺激性气味,过多吸入对人体有害,故建议在通风橱中进行操作。
实验实例:
1、 称取0.05g卫矛茎加入0.5mL提取液进行样本处理,取上清后稀释2倍按照测定步骤操作,测得并计算ΔA测定=A测定管-A空白管=0.639-0.002=0.637,带入标准曲线y=2.3529x+0.0015,计算x=0.27,按照公式计算得:
植物中木糖含量(mg/g)=x×V提取÷W1×2(稀释倍数)=0.27×0.5÷0.05×2=5.4 mg/g。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!