产品详情
土壤尿酸酶活性检测试剂盒说明书
紫外分光光度法
规格:50T/24S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、试剂一:自备甲苯;
2、试剂二:临用前按照试剂二 A 液︰试剂二 B 液= 1︰35 的比例混合,根据样本量所需使用当天现配现用;
3、标准品:5 μmol/mL 的尿酸溶液。
产品说明:
土壤尿酸酶(Soil Uricase,S-UR)是一种与核酸代谢有关的氧化还原酶,主要是将土壤中的核酸腺嘌呤与尿酸等物质转化成尿囊素和尿囊酸,进而生成尿素供植物利用。
土壤尿酸酶能够催化尿酸生成尿囊素、CO2和 H2O2,尿酸在 284 nm 有特征吸收峰,通过测定反应前后尿酸的减少量,来表示土壤尿酸酶活性。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、研钵、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、冰、30~50 目筛、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干,过 30~50 目筛。
二、测定步骤
1、紫外分光光度计预热 30 min 以上,调节波长至 284 nm,蒸馏水调零。
2、将 5 μmol/mL 标准溶液用蒸馏水倍比稀释为 0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625 μmol/mL 标准溶液待用。
3、标准液稀释可参考下表:
备注:实验中每个标准管需 150μL 标准溶液。
4、加样表:
充分混匀,于 1 mL 石英比色皿中测定 284 nm 处吸光值,记为 A 测定管、A 对照管、A 无土管、A 标准管和 A 空白管。计算ΔA 测定=(A 无土管-空白管)-(A 测定管-A 对照管)、ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。每个测定 管需设一个对照管,同一批次样本检测无土管、空白管只需检测 1-2 管,标准曲线只需测 1-2 次。
三、土壤尿酸酶活性计算
1、 标准曲线的绘制:
根据标准管的浓度(x,μmol/mL)和吸光度ΔA 标准(y,ΔA 标准),建立标准曲线。根据标准曲线,将ΔA测定(y,ΔA 测定)带入公式计算样本浓度(x,μmol/mL)。
2、 土壤尿酸酶活性的计算:
酶活定义:每天每 g 土样中消耗 1 μmol 的尿酸定义为一个酶活力单位。
土壤尿酸酶活力(U/g 土样)=x×V 反总÷W÷T=1.525x÷W
T:反应时间,1 d = 24 h;V 反总:反应体系总体积:1.525 mL;W:样本质量,g。
实验实例:
1、 称取两管 2-1-20 号土样 0.1g,按照操作步骤进行测定,测得计算ΔA=(A 无土管-空白管)-(A 测定管-A 对照管)=(1.136-0.001)-(0.703-0.05)=0.482,带入标准曲线 y=1.7444x - 0.0013,计算 x=0.2771,按照计算公式计算酶活得:
土壤尿酸酶活力(U/g 土样)= 1.525×x÷W=1.525×0.2771÷0.1=4.226 U/g 土样。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!