特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品详情
产品及特点 Bodian 染色法是美国科学家 David Bodian 1936 年首创的用于观察神经元、 轴突和树突内神经原纤维的浸银染色法,其工作原理是把石蜡切片浸于银溶液中 , 再用还原液使银颗粒沉积于神经纤维上并呈棕色或棕黑色。传统 Bodian 法的染色 是在 37℃进行,Clark 改良法将温度改为 60℃,本试剂盒即根据改良方法开发, 跟具有下列特点:
1. 一站式,用户不需要单独购买和配制各种溶液。
2. 降低了背景色深,减轻了血管和胶原纤维的共染现象,便于观察神经纤维。
3. 染色和还原时间更短,降低了脱片现象。
4. 本试剂盒可用于细胞涂片、切片和实体组织的显色检测。
5. 产品稳定性好、可以长期保存、不易产生沉淀。
6. 本规格足够进行 100 次切片的染色(不含切片制备和脱蜡封固等试剂),本产 品只能用于科研。
规格及成分
运输及保存 常温运输和保存,有效期一年。
自备试剂 蒸馏水、载玻片、显微镜
使用方法 一:准备工作
1. 配制蛋白银溶液(以配制 10mL 为例,足够 10 张切片):在干净的培养细菌的玻璃培养皿中加入 10mL 蒸馏水,再将蛋白银研磨成粉,称取 0.1g 然后慢慢抖入到培养皿中,让蛋白银干粉在静止状态下缓慢溶解进入水中,期间不要摇晃,直到彻底溶解。蛋白银溶液必须现配现用。
2. 配制还原液(以配制 10mL 为例,足够 10 张切片):称 0.5g 还原液成分一和0.1g 还原液成分二,加自备蒸馏水 10mL 溶解即可。此溶液不能保存后再使用,必须现配现用。本试剂盒提供的 10mL 试剂瓶可以反复使用。
3. 配制氯化金 1%溶液:在本试剂盒提供的 125mL 塑料瓶中加入 100mL 自备蒸馏水,再加入 1g 氯化金溶解待用。
4. 配制草酸溶液:在本试剂盒提供的 125mL 塑料瓶中加入 100mL 自备蒸馏水,再加入 2g 草酸溶解待用。
5. 配制固定液:在本试剂盒提供的 125mL 塑料瓶中加入 100mL 自备蒸馏水,再加入 5g 固定剂溶解待用。
二、切片的染色
6. 固定组织并制备厚度为 10-15um 的切片。制备切片时最好使用 Bodian 专用固定液(甲醛原液 5mL、冰乙酸 5mL、80%乙醇 90mL),但本染色法也跟其他常用的各种固定液兼容。本试剂盒不提供固定液。
7. 将切片脱蜡至水。
8. 在 Coplin 染色缸中加入 10mL 蛋白银溶液,然后加入一张新鲜处理的铜箔(处理方法:在干净的培养细菌的玻璃培养皿中加入 7mL 水和 3mL 自备硝酸,混匀,用镊子将一片铜箔(约 0.5g)浸入到硝酸溶液中,硝酸溶液将去其表面的氧化层,当铜箔表面变成金黄色时用镊子取出铜箔并迅速用自来水冲洗干净,折叠到适当大小并放入到装有蛋白银溶液的 Coplin 染色缸底部),然后放入切片,将染色缸密封后放 60℃温箱内染色 4~16 小时(或 37℃24-48 小时)。如果选择 60℃染色,最好每 1 小时肉眼检测一次,当切片呈金棕色时即停止染色。如染色时间太短,只有较粗的纤维可被轻微的染上,如果染色过头会产生过深背景。
9. 在蒸馏水内稍洗一下,把附着在载玻片和切片表面的染料去掉。洗的时间不宜太长,否则会把染色去掉,只留下已被浸染的粗纤维。
10. 在新制备的还原液中还原 2-3 分钟。
11. 用蒸馏水彻底洗去还原液。
12. 在 1mL1%氯化金溶液加 1.5uL 冰乙酸,混匀。将切片放入此 1%氯化金溶液中调色 10 分钟。
13. 用蒸馏水洗净。
14. 如果此时切片呈淡紫色或蓝色则跳过此步,如果还不呈淡紫色,则将切片放入到草酸溶液中 2-5 分钟,直到切片呈浅紫色或蓝色时取出。
15. 用自来水冲洗切片 5 分钟。
16. 将切片放在固定液中固定 5 分钟。
17. 自来水洗净切片。
18. 对切片进行梯度酒精脱水、二甲苯透明和中性树胶封固(本试剂盒不含相关试剂)。
19. 显微观察切片:轴突、神经元纤维将呈现黑色或紫黑色。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!