特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品详情
产品及特点 改良 Bielschowsky 神经染色试剂盒是基于 Bielschowsky 镀银染色法开 发的产品,其基本原理为固定后的神经组织和切片浸染于银溶液中,再用还原 剂处理,使银颗粒沉着在轴索的轴浆中使之呈现深棕色或黑色。镀银后可在神 经元胞浆内看到许多交错成网的细丝,并伸向树突及轴突中。本方法可以用于 Alzheimer 疾病和其他神经性疾病的研究。本产品就是基于上述原理开发,它 具有下列特点:
1、一站式、用户不需要单独配制每种成分。
2、使用于石蜡包埋切片和冷冻切片。
3、本方法着色缓慢,便于在显微镜下边观察边操作,方便在得到满意的结 果时终止染色。
4、本产品足够 100 张切片的改良 Bielschowsky 神经染染色。
规格及成分
运输及保存 常温运输和保存,有效期一年。
自备试剂 载玻片、蒸馏水、显微镜
使用方法
注意事项:下述操作只能使用非常干净的玻璃容器、玻璃染色缸或玻璃脱色缸。 石蜡包埋切片的染色
1. 实验前先将溶液 A(硝酸银溶液)加入到染色缸中放 37℃水浴中预热。
2. 石蜡包埋切片的准备(本试剂盒不含相关试剂):制备石蜡切片的组织必 须用 10%中性甲醛固定,切片厚度为 8-15 μm。染色前按常规方法脱蜡 到水洗步骤,然后直接进入第 4 步。
3. 冰冻切片的准备(本试剂盒不含相关试剂):用新鲜组织制备冷冻切片, 厚度为 20-40μm。把切片从恒冷箱中取出,自然凉干或冷风机吹干。浸 入自备的无水乙醇乙醚液(乙醇:乙醚=1:1)稍洗,在自备的 0.5%火棉胶 溶液(以无水乙醇乙醚液为溶剂,乙醇:乙醚=1:1)中浸泡 30 秒,取出切 片,抹去片段底面多余的火棉胶液。将切片放入自备的 80%乙醇中 10 分 钟,蒸馏水洗 1~2min,然后直接进入第 4 步。火棉胶处理可以防止组 织在后续处理时从切片上脱落。
4. 将切片放入 37℃预热的溶液 A(硝酸银溶液)中,并置于 37℃温箱内浸 染 25-35 min。
5. 将切片用蒸馏水洗 3~5min。
6. 将切片放入溶液 B(甲醛溶液)中还原数秒,切片将呈现黄色。
7. 用蒸馏水洗涤切片 3~5min。
8. 将切片放入新鲜配制的氨银溶液工作液中滴染 20-40 秒。氨银溶液工作 液的配制方法如下:在一干净的玻璃试管或小三角中(不要用塑料离心管 或塑料瓶,必须彻底清洗干净)加入 3mL 溶液 C(氨银溶液母液),再加 入 2mL 自备的无水乙醇,混匀后再逐滴加入氨水,直到形成的黑色沉淀 刚溶解(一般需要约 0.75mL 左右的氨水)。氨银溶液工作液需要即配即 用。如果配制其他体积,各成分的用量请按比例增减。
9. 倾去氨银溶液工作液,再将切片放入溶液 B(甲醛溶液)中还原,直到切 片呈棕黑色。一般需要 1-2 分钟。
10. 用蒸馏水洗涤切片 3~5min,
11. 显微镜下观察。如果背景过黑则用溶液 D(氯化金溶液)调色 3~5min, 再用蒸馏水浸泡 1~2min。调色可以使背景更清晰,神经元着色更深。 如果背景合适则直接进入下步,不需要调色。
12. 用溶液 E(硫代硫酸钠溶液)固定 3~5min。此步可以防止褪色。
13. 用蒸馏水洗涤切片 3~5min,然后用滤纸吸干切片周围水分。
14. 用无水乙醇开始的各种浓度的乙醇梯次脱水。如果是冰冻切片,再用无水 乙醇乙醚液(乙醇:乙醚 1:1)去除火棉胶。最后用二甲苯透明,中性树胶 封固保存。
15. 染色结果是神经元、轴突和神经纤维呈深紫色至黑色。细胞核或背景呈现 黄色或金色。白质和灰质呈现黄棕色。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!