产品详情
柱式软体RNA提取试剂盒(柱式软体RNAout)
产品及特点
本产品专门从各种软体组织样品中快速提取总RNA的试剂盒,它能有效克服传统TRIzol方法提取软体组织 RNA时,十分容易产生糖蛋白和酸性多糖污染这一缺点。本产品具有下列特点:
1.适用于用常规方法难以提取的、各种富含多糖的软体动物,包括螺类、贝类、乌贼、章鱼和蜗牛等。
2.能有效去除糖蛋白、粘蛋白污染,OD260/280一般均在1.9以上。
3. RNA产率一般为5-15 ug/ 100 mg。
4.操作简单,整个提取过程一般只需要10多分钟。
5.得到的RNA可以直接用于RT-PCR,Northern杂交、mRNA纯化、PrimerExtension、RNA Protection、in vitro translation等研究。
规格及成分
运输及保存 常温运输,4℃保存,有效期一年。
自备试剂 氯仿。
使用方法
1.先将50-200 mg新鲜或冷冻的软体组织液氮研磨成粉,加入 1 mL溶液A溶解(溶液A使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并摇晃混匀),然后将研磨物转移到新的1.5 mL离心管中,振荡混合30秒。也可以将软体组织剪碎后与溶液A一起用Polytron匀浆机(内切式匀浆机)勾浆5-20秒,再转移到1.5 mL离心管中。匀浆时会产生泡沫,但不影响提取效果。
2.在离心管中加入0.3 mL的溶液B和0.2 mL自备氯仿,在振荡器上振荡30秒混匀,此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
3.室温12000-15000g离心3-5分钟,两相间将有约5-10毫米厚的细胞破碎物。
4.将上清液(约0.6 mL)转移到另一干净的1.5 mL塑料离心管中,下层有机相和中间层含有DNA、蚩白质和其他杂质,避免触及或吸取。最好留下100 uL上清液不取。
5.加入等体积的溶液C,充分颠倒混匀。
6.将一半的溶液转移到离心吸附柱中,12000-15000 g室温离心半分钟,弃穿透液。
7.将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中,12000-15000g室温离心半分钟,弃穿透液。
8.加0.7 mL通用洗柱液,室温离心半分钟,弃穿透液。此步可以省略。
9.加0.3 mL通用洗柱液,室温离心半分钟,弃穿透液。此步可以省略。
10.室温离心半分钟。此步十分重要,否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
11.将离心吸附柱转移到自备的RNase-free离心管中,加入50-100 uL RNA洗脱液,室温放置1-2分钟。
12.12000-15000 g 室温离心半分钟,离心管中溶液即为RNA样品,可以立即使用或存放于-80℃待用。
13.RNA完整性的电泳检测:如果需要做Northern杂交,强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA 电泳,因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques,28: 414,2000)。
14.RNA产量产率测定:将5-10 uL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之
间)检测其在OD260的光吸收.通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40 ug/mL),进而计算出RNA 的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。注意:测定OD时不要稀释过度,否则浓度会在仪器能测的范围之外。本方法提取的RNA测OD时一般最多只能稀释10-20倍。
15RNA纯度测定:无污染的总RNA 的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染,但一般不影响RT-PCR等反应。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!