产品详情
β-gal半乳糖苷酶检测试剂盒
产品及特点 β-半乳糖苷酶(β-Galactosidase, β-GAL;EC 3.2.1.23)广泛存在于 动物、植物、微生物和培养细胞中,能够催化β半乳糖苷化合物中的β半乳糖 苷键水解,此外还具有转半乳糖苷的作用。β-GAL 不仅可为植物的快速生长 释放储存的能量,还能在正常的多糖代谢、细胞壁组分代谢以及衰老时细胞壁 降解过程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖残基的水解,释放自由 的半乳糖。 本产品是分光光度法测定β-GAL 活力的,测定原理为β-GAL 分解对-硝基 苯-β-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基苯酚,后者在 400 nm 有最大吸收峰,通 过测定吸光值升高速率来计算β-GAL 活性。
规格及成分
运输及保存 低温运输,4℃保存,其中试剂 A 需-20℃保存,有效期半年。
自备试剂 无
使用方法 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
一、酶液提取
1. 细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细 菌或细胞数量(104个):酶提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比 例(建议 500 万细菌或细胞加入 1 mL 酶提取液),超声波破碎细菌或 细胞(冰浴,功率 20%或 200 W,超声 3 秒,间隔 10 秒,重复 30 次); 15000 g 4℃离心 10 分钟,取上清,置冰上待测。
2. 组织:按照组织质量(g):酶提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建 议称取约 0.1 g 组织,加入 1 mL 酶提取液),进行冰浴匀浆。15000 g 4℃离心 10 分钟,取上清,置冰上待测。
二、测定操作步骤
1. 分光光度计预热 30 分钟以上,调节波长至 400 nm,蒸馏水调零。
2. 取出试剂 A,临用前向试剂瓶中加入 5 mL 蒸馏水,充分溶解备用,制备 成溶液 A 工作液(用不完的溶液 A 仍需-20℃保存)。
3. 样本测定(在 EP 管中依次加入下列试剂):
三、酶活性计算公式
标准条件下测定的回归方程为 y=0.00543x -0.0027;x 为标准品浓度 (nmol/mL),y 为吸光值。 注:V 反总:反应总体积,0.5 mL;V 样:反应中样本体积,0.05 mL; V 样总:加入酶提取液体积,1 mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W: 样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500 万;T:反应时间,30 分钟。
1. 按照样本蛋白浓度计算: 酶活性定义:每 mg 组织蛋白每分钟产生 1 nmol 对-硝基苯酚定义为一 个酶活力单位。 β-GAL 活力(nmol/min/mg prot)=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V 反总] ÷(V 样×Cpr)÷T=61.39×(ΔA+0.0027) ÷Cpr 如果需要另外测定,建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
2. 按照样本鲜重计算: 酶活性定义:每 g 组织每分钟产生 1 nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活 力单位。 β-GAL 活力(nmol/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V 反总]÷ (W×V 样÷V 样总)÷T=61.39×(ΔA+0.0027) ÷W
3. 按细菌或细胞密度计算: 酶活性定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟产生 1nmol 对-硝基苯酚定义 为一个酶活力单位。 β-GAL 活力(nmol/min/104cell)=[(ΔA+0.0027)÷0.00543×V 反总] ÷(500×V 样÷V 样总)÷T=0.123×(ΔA +0.0027)
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!