产品详情
RIPA裂解液(弱强度)
产品及特点
RIPA (Radio Immunoprecipitation Assay)裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等实验。本产品裂解能力强度温和,对膜蛋白的处理能力一般;对核蛋白的提取能力较好﹔对胞浆蛋白、胞浆磷酸化蛋白和各种转录因子处理效果很好。本产品含有各种蛋白酶和磷酸蛋白酶抑制剂,能有效防止各种蛋白酶对目的蛋白的降解。我公司各种RIPA裂解液产品特点见下表
规格及成分
运输及保存 常温运输和保存,有效期一年。
自备试剂
使用方法
对于培养绷胞祥品
1.融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
2.裂解细胞
2.1对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。
2.2对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。
3.充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、western和免疫沉淀等操作。
注意:通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。
对于组织样品:
1.把组织剪切成细小的碎片。
2.融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
3.按照每20毫克组织加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
4.用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
5.充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。5.如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex 使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
注:RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组 DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!