产品详情
一管式拭子DNAout(改名液体样品DNAout)
产品及特点
本试剂盒适用于口腔试子基因组DNA 提取。试剂盒采用了独特的细胞裂解体系,细胞在裂解、蛋白变性降解、核酸 蛋白分离后,核酸特异吸附结合到硅胶膜上,通过简单漂洗去除杂质,并快速纯化得到基因组 DNA 。使用本试剂盒得到的基因组 DNA 无蛋白、核酸酶污染,能满足基因检测、组织分型等所需要的 DNA 量,也可满足 PCR 、酶切和杂交等分子生物学实验 。它具有下列特点:
1. 简便快速:可快速从口腔试子中获得高纯度 的基因组 DNA
2. 安全:无需有机溶剂抽提,使用安全;
3. 稳定:所得 DNA 纯度高,重复性好,方便下游应用 。
规格及成分
成份 | 50 次包装 | 100 次包装 |
Buffer GTL | 20mL | 40mL |
Buffer GL | 20mL | 40mL |
Buffer W1 concentrate | 13 mL | 26 mL |
Buffer W2 concentrate | 15 mL | 30mL |
Buffer EB | 10 mL | 10 mL |
Proteinase K | 1 mL | 2×1 mL |
Spin Column with Collection Tubes | 50套 | 100套 |
使用手册 | 1份 | 1份 |
运输及保存
蛋白酶K 于 -20℃,其他组分室温 15 ~ 25℃,可保存 12 个月。
自备试剂
无水乙醇、RNase A (可选)
(取样方式:使用棉签在面颊内擦拭 10 次,为保证样本不被食物或饮料污染,取样前 30 分钟内请勿进食或饮水。)
使用方法
1. 材料处理:将在面颊内擦拭过的棉签用剪刀将棉签部分从其杆上剪下,置于 2 ml 离心管中,加入400 μl Buffer GTL 。
(注意:如果需要去除 RNA ,可加入 4 μl RNase A 100 mg/ml )溶液),振荡混匀,室温放置 5min)
2. 加入 20 μl Proteinase K 溶液,涡旋 10 sec 混匀, 56℃ 水浴 1 h ,其间每 15 min 涡旋混匀一次。
3. 加入 400 μl Buffer GL ,充分颠倒混匀 70℃ 水浴 10 min 。此时溶液应变清亮,简短离心以去除管盖内壁的液滴,然后挤压 去除拭子,将尽可能多的裂解液转移至新的离心管中。
(注意: a 加入缓冲液 GL 时可能会产生白色沉淀,一般 70℃ 水浴时会消失,不会影响后续实验。如溶液未变清亮,说明细胞裂解不彻底,可能导致提取 DNA 量少和提取出的 DNA 不纯。 b 如果由于拭子上细胞数少导致提取的基因组 DNA 少于 1 µg ,可以在添加缓冲液 GL 的同时添加 CarrierRNA (客户自备))
4. 加 500 μl 无水乙醇,充分颠倒混匀,简短离心以去除管盖内壁的液滴。
(注意:加入无水乙醇后可能会出现絮状沉淀,但不影响 DNA 提取)
5. 将上一步所得溶液和 絮状沉淀分批加入一个吸附柱中, 10,000 rpm 离心 30 sec ,倒掉收集管中的废液,将吸附柱放回收集管中。
6. 向吸附柱内加入 500 μl Buffer W1 ,室温 10,000 rpm 离心 30 sec ,弃收集管中废液。
(注意:Buffer W1 按要求加入无水乙醇,用后及时盖紧,以防乙醇挥发)
7. 向吸附柱内加入 500 μl Buffer W2 ,室温 10,000 rpm 离心 30 sec ,弃收集管中废液。
(注意:Buffer W2 按要求加入无水乙醇,用后及时盖紧,以防乙醇挥发)
8. 重复步骤 7 一次 。
9. 室温 12,000 rpm 离心 2 min ,甩干残留液体。
(注意:此步不能省略,否则残留乙醇会影响基因组DNA 的后续使用)
10. 将离心吸附柱置于一个新的 1.5 ml 塑料离心管(自备)中,加入 30 ~ 50 μl Buffer EB ,室温放置 2 min 。 10,000 rpm 离心 2 min ,离心管底溶液即基因组 DNA 。
(注意:为增加洗脱效率,可将洗脱液在60℃ 预热。如需使用去离子水洗脱,可用 NaOH 调整其pH 值在 7.0 8.5 之间,为了增加基因组 DNA 回收率,可将得到的溶液重新加入到离心管中, 室温放置 2 min ,再次离心收集)
注意事项
如BufferGTL和Buffer GL产生沉淀,可在56℃水浴溶解;
样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段小,提取量下降;
所有离心步骤均为台式离心机,室温下操作;
按要求在Buffer W1/W2中加入无水乙醇。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!