轮状病毒A群RT-PCR试剂盒

【产品名称】

英文名称：Rotavirus A RT-PCR Kit

中文名称：轮状病毒A群RT-PCR试剂盒

【包装规格】

50T/盒

【预期用途】

轮状病毒 A 群（Rotavirus A）是婴幼儿和幼畜腹泻的主要病因之一，由其引起的腹泻发病率很高。常见的传播途径为食用被污染的食品、水及生活接触，然后通过人间传播方式导致更多人感染。人感染轮状病毒后临床症状相似，主要表现为呕吐和腹泻，与其他病原造成的胃肠炎症状难以区别。本产品是根据 PCR原理开发的轮状病毒 A 群检测的试剂盒。它具有下列特点：

1. 一站式，用户不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。

2. 根据轮状病毒 A 群的保守基因序列设计的引物，具有良好的特异性。

3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。

4. 使用一管式 RT-PCR 技术，RT 和 PCR 两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。

5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。

6. 本产品只能用于科研，不能用于临床。

【检验原理】

本试剂盒采用RT-PCR技术，针对轮状病毒A群的基因高度保守区域设计特异性引物，用RT-PCR 技术对轮状病毒A群的核酸进行体外扩增检测，在反应体系中含轮状病毒A群核酸模板的情况下，RT-PCR反应进行特异性扩增，利用琼脂糖凝胶电泳技术对RT-PCR扩增产物进行检测，依据特异性扩增片段的结果，判断待检样品中是否含有轮状病毒A群成分，实现检测结果的定性分析。

【试剂组成】

注：为避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的DNA 片段作为阳性对照。

【储存条件及有效期】

低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。

【自备试剂】

样品 RNA。

【样品RNA的制备】

1. 如果有 N 个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是 PC（样品制备阳性对照），一个是 NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL轮状病毒A群PCR阳性对照的10000倍稀释的（稀释后浓度为1×10E4 拷贝/μL，10μL 相当于1万拷贝，可以将10μL原液加入到990μL自备TE溶液中，充分混匀，此为100倍稀释液。再取10μL此稀释液加入到990μL自备TE溶液中，充分混匀，此为10000倍稀释液）再加上一定量的水作为制备的阳性对照（加水后其总体积跟样品一样，样品体积多少取决于所用试剂盒的要求）。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品 RNA。

2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。

【设置 RT-PCR 反应（20μL 体系】

3. 如果有N+2个样品，则标记N+4个PCR管（额外增加的两个管一个是RT-PCR阳性对照，另一个是RT-PCR阴性对照）并按照下表在PCR管中加入下列成分：

4. 上机进行 RT-PCR，RT-PCR 反应参数为:

5. 琼脂糖电泳检测扩增效果，阳性样品预期得到的扩增产物长度为 720bp。如果阴性对照有此扩增产物或阳性对照无此扩增产物，则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有此扩增产物、阳性对照有此扩增产物的情况下，才有必要分析样品的实验结果，如果有此扩增产物则为阳性，如果无则为阴性。

6. 检测方法的局限性

Ø 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；

Ø 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；

Ø 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；

Ø 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；

Ø 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果。

7. 注意事项

Ø 所有操作严格按照说明书进行；

Ø 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，混匀并短暂离心；

Ø 反应液应避光保存；

Ø 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；

Ø 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；

Ø 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；

Ø 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；

Ø 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！