产品详情
H2S 含量测定试剂盒说明书
H2S Assay Kit
分光光度法
规格: 50T/48S
产品组成及保存条件:
简介: 意义:H2S 是一种新型气态信号分子,存在于脑内的神经递质,生理浓度的 H2S 对神经系统海马的 长时程增强功能具有重要的调节作用,并对自发性高血压、出血性休克及肝硬化等疾病的过程发挥着重要 的病理生理效应。 原理:H2S 与醋酸锌、N, N-二甲基对苯二胺和硫酸铁铵等反应生成亚甲基蓝,亚甲基蓝在 665nm 处 有最大吸收峰,通过测定其吸光值可计算 H2S 含量。
需自备的仪器和耗材: 天平、低温离心机、可见分光光度计、比色皿、蒸馏水。
使用说明:
一、 样品处理:
组织:按照组织质量(g):提取液 ES01 体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织, 加入 1mL 提取液 ES01)进行冰浴匀浆,然后 10000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。 2. 细菌、真菌:按照细胞数量(10 4 个):提取液 ES01 体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建 议 500 万细胞加入 1mL 提取液 ES01),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 10000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。 3. 血清(浆):直接测定。
二、 测定步骤:(取 1.5ml 离心管,按照下表操作)
三、H2S 含量计算公式:
标准曲线回归方程为:y = 0.0044x,R2 = 0.9988
1. 组织样品: a. 按照蛋白浓度计算: H2S (μmol/mg prot) = A665 ÷ 0.0044 × V 反总 ÷ (V 样×Cpr) × 10-3 = 0.727 × A665÷Cpr b. 按照样本重量计算: H2S (μmol/g) = A665 ÷ 0.0044 × V 反总 ÷ (V 样 ÷ V 样总 × W) × 10-3 = 0.727 × A665 ÷ W 2. 液体样本: H2S (μmol/L) = A665 ÷ 0.0044 × V 反总÷V 样 = 727 × A665 3. 细胞样本: H2S (μmol/104 cell) = A665 ÷ 0.0044 ×V 反总 ÷(V 样÷V 样总×细胞数量(万个) × 10-3 = 0.727×A665÷细胞数量(万个) 注:V 反总:反应总体积,0.8mL;V 样:反应中样品体积,0.25mL;V 样总:加入提取液体积, 1mL;W:样品质量,g;Cpr:蛋白浓度,mg/mL。