产品详情
Bradford 法蛋白定量测定试剂盒
Bradford Protein Assay Kit
产品信息:
本试剂盒有效期一年
产品简介:
Bradford 蛋白浓度测定法是目前常用的灵敏度较高的蛋白浓度测定方法之一,其实验原理是根据 考马斯亮蓝(Coommassie Brilliant Blue)G-250与蛋白质的碱性和芳香族氨基酸特别是精氨酸(Arginine) 在酸性介质中结合后,溶液转变为蓝色,使染料的最大吸收峰从 465nm 迁移到 595nm,且测定的吸光 值与蛋白浓度成正相关关系;即可通过测定蛋白在 595nm 处的吸光度,推算蛋白浓度,进而进行定量 测定。
本法通过吸光值,推算蛋白浓度,实现了蛋白浓度测定的快速性和简便性。灵敏度高,比 Lowry 法 大约高四倍,测定速度快、简单,仅需一种试剂即可,且不受大多数样品中化学试剂的影响。
注意事项:
1. Bradford 染色液使用前,需将其恢复至室温,有利于提高检测的灵敏度;并在使用前充分混匀
2. 标准曲线也有轻微的非线性,因而不能用 Beer 定律进行计算,而只能用标准曲线来测定未知蛋白质的浓度;为了得到更精确的结果,每个蛋白梯度和样品均需做复孔,每次试验都必须建立标准曲线
3. Bradford 法测定蛋白浓度对大多数化学物质的兼容性比较好,比如对还原剂 DTT 的兼容性高达5mM;但会受到略高浓度的去垢剂影响,需确保 SDS 低于 0.01%,Triton X-100 低于 0.05%,Tween20/ 60/80 低于 0.015%等
4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作
使用说明:
一.配制 BSA 标准品体系(线性范围 100-1500ug/ml):
可参考下表配制不同浓度的标准品梯度 ,并充分混匀,避免气泡生成:
标准品稀释液原则上应与为蛋白样品的溶解液一致,但也可用蒸馏水、生理盐水或 PBS 进行稀释
二. 蛋白浓度测定:
(1)分别取 5µl 不同浓度蛋白标准品和待测样品加入 96 孔板中;若样品不足,可以用稀释液进行稀释,但须记录样品稀释比例
(2)各孔加入 200µl G250 染色液,充分振荡混匀,室温孵育 2-3min
(3)用酶标仪测定 595nm 处的吸光度
(4)以标准蛋白浓度(ug/ml)为横坐标,用 OD 值为纵坐标绘制标准曲线,根据测出的待测样品的 A595 值,即可得出样品的蛋白质浓度,进而进行定量计算
参考标准曲线:
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!