产品详情
细胞增殖及毒性检测试剂盒
产品规格:100T 500T 10×500T
保存条件:-20℃可保存至少一年。避免反复冻融,建议分装保存。
产品简介:
Enhanced cell Counting Kit-8,即增强型 CCK-8 试剂盒,是一种基于 WST-8 而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒。WST-8 在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的 formazan (见下图) ,且细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅 (生成的 formazan 量) 和细胞数目呈线性关系。
WST-8 是 MTT 的一种升级替代产品,和 MTT 或其它 MTT 类似产品,如 XTT、MTS 等相比有明显的优点。 ,MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的 formazan 不是水溶性的,需要有特定的溶剂来溶解;而 WST-8 和 XTT、MTS 产生的formazan 都是水溶性的,可以省去后续的溶解步骤。 ,WST-8 产生的 formazan 比 XTT 和 MTS 产生的 formazan 更易溶解。第三,WST-8 比 XTT 和 MTS 更加稳定,使实验结果更可靠。第四,WST-8 和 MTT、XTT 等相比线性范围更宽,灵敏度更高,并且更加稳定。
WST-8 对细胞无明显毒性,可以直接加入到细胞样品中,无需预配各种成分;显色后,可以在不同时间反复用酶标仪读板,检测时间更加灵活,便于确定 测定时间;酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。
使用说明:
本试剂盒可用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测,也可用于 药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测,或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。
细胞数目检测
1. 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞。
2. 按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,设置 5-7 个细胞浓度梯度,每组 3-5 个复孔。
3. 接种后培养 2-4h 使细胞贴壁,然后每 100μL 培养基加 10μL CCK-8 试剂培养 1-4h 后测定 OD 值。
4. 以细胞数量为横坐标,OD 值为纵坐标绘制标准曲线。
5. 在实验条件完全一致的条件下可以根据标准曲线,推算出未知样品的细胞数量。
细 胞 活 性检测
1. 在 96 孔板中接种细胞悬液(以每孔不低于 5000 个/100μL 为宜),根据具体实验情况培养过夜或一定时间。
2. 每孔加入 10μL CCK-8 溶液,避免气泡生成。
3. 将培养板置于培养箱内孵育 1-4h,孵育时间需根据细胞的类型和细胞密度等具体情况而定;2h 显色效果 。
4. 用酶标仪测定 450 nm 处的吸光度;若暂时不测定 OD 值,每孔加入 10μL 1%SDS 或 0.1M HCl,避光室温保存,24 小时内进行测定 。
细胞增殖-毒性检测
1. 在 96 孔板中接种细胞悬液(以每孔不低于 5000 个/100μL 为宜),根据具体实验情况培养细胞过夜或一定时间。
2. 每孔加入不同浓度的待测药物。
3. 将培养板在培养箱孵育一定时间。
4. 每孔加入 10μL CCK-8 溶液,避免气泡生成 。
5. 将培养板置于培养箱内孵育 1-4h,孵育时间需根据细胞的类型和细胞密度等具体情况而定;2h 显色效果 。
6. 用酶标仪测定 450nm 处的吸光度;若暂时不测定 OD 值,每孔加入 10μL 1%SDS 或 0.1M HCl,避光室温保存,24 小时内进行测定 。
计算公式:
细胞存活率 =[(ODs-ODb) / (ODc-ODb)] ×
抑 制 率 =[(ODc-ODs) / (ODc-ODb)] ×
ODs: 实验孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8 溶液和药物溶液)
ODc: 对照孔吸光度 (含细胞、培养基、CCK-8 溶液,不含药物)
ODb: 空白孔吸光度 (含培养基、CCK-8 溶液,不含细胞、药物)
质量验证数据展示:
细胞系及细胞总量:SP2/0、105个/100ul
培养条件:DMEM,10%FBS;37℃,5% CO2;
孵育时间:1h\2h\3h
注意事项:
1 每孔所用细胞数目需根据细胞的大小、增殖速度及实验具体要求而定,建议细胞总量范围为 0-105个/孔。
2 实验中可以用加了等量细胞培养液和 CCK-8 溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照;若担心所使用的药物会干扰检测,需设置加了等量细胞培养液、药物和 CCK-8 溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。
3 CCK-8 加入量根据培养体积确定,添加量为 10ul/100ul 培养体积。
4 若细胞培养时间较长,培养基颜色发生变化,建议更换培养基后再加 CCK-8 检测。
5 为了使 CCK-8 试剂盒培养基充分混匀,减少 CCK-8 在移液器上的残留,建议加样前用培养基稀释CCK-8 试剂,混匀后加样。
6 若待测体系中含有还原剂(或抗氧化剂)会造成背景值升高,干扰检测结果,应在加 CCK-8 试剂前将其去除或折算干扰因素。
7 本产品保存时建议避光保存,使用时也请尽量避免强光直射。
8 本产品 于专业人员的科学研究,不得用于临床诊断或 ,不得用于食品或药品。
9 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!