产品详情
一步法荧光定量 PCR 试剂盒(染料法)
One-Step qRT-PCR Kit (Green)
规格:100 rxn /500 rxn /1000 rxn
保存条件:
-20℃避光保存,有效期 24 个月。
产品简介:
本产品是采用 SYBR Green I 嵌合荧光法进行一步法实时荧光定量检测的专用试剂盒。使用本产品进 行 Real Time RT-PCR 反应时以提取的 RNA 为模版,在同一反应管内连续进行反转录和荧光定量检测, 操作简单,并能有效防止污染。本产品基于高效的反转录酶、抗体型 Hot start Taq DNA 聚合酶配合优化 的 Buffer 体系研制,在提高检测灵敏度的同时保证了扩增的特异性;非常适合于 RNA 病毒等微量目标基 因的检测。 本产品具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点,使用时只需加入模板、引物、ROX Reference Dye(用以校正孔与孔之间产生的荧光信号误差,根据不同荧光定量 PCR 仪选择使用)和水, 使其工作浓度为 1×,即可进行反应,可减少人为误差、节约 PCR 实验操作时间、降低污染几率。
产品组分:
*注:不同仪器所需 ROX Reference Dye 不同:
需加 ROX Reference Dye(50×)的机型:ABI Prism7000/7300/7700/7900HT 和 ABI Step One /ABI Step One Plus。
需加 ROX Reference Dye II(50×)的机型:ABI Prism7500/7500 Fast, MJ Research Chromo4, Opticon (II) ,Corbett Rotor Gene 3000。
无需加 ROX Reference Dye 的机型: Thermal Cycler Dice Real Time System , LightCycler , Smart Cycler System,Corbett Rotor-gene 6000, Agilent Technologies Mx3000P 等荧光定量 PCR 仪。
使用注意:
1. 实验过程中请注意避免 RNase 污染。
2. 除酶以外的各种试剂,使用之前请完全溶解并充分混匀,以防因盐离子浓度不均影响实验结果。
3. RNA 模板的完整性对 cDNA 合成效率起着决定性作用,因此请选择可靠的 RNA 提取/纯化方法。
4. 如果扩增片段较长或者 RNA 结构复杂,可以将 RNA 单独置于 65℃加热 5-10 min 后再加入体系提高反转录效率。
5. 制品只能使用特异性反转录引物,不能使用 Random Primer 和 Oligo dT Primer 等进行反转录反应。
6. 当同时需要进行数次 One Step qRT-PCR 反应时,应先配制各种试剂的混合液,然后再分装到每个应管中。这样,可使所取的试剂体积更准确,减少试剂损失,避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验样品之间产生的误差。
7. 使用 One Step Enzyme Mix 时,应轻轻混匀,避免起泡;分取之前要小心地离心收集到反应管底部;由于酶保存液中含有 50%的甘油,粘度高,分取时应慢慢吸取。-20℃保存,使用后立即放回冰箱。
操作示例:
1、按下表配制 PCR 反应体系:
*:以 Hela 细胞 Total RNA 模板为例,20 μl 反应体系中加入 Total RNA 的量为 10 pg-100 ng 为宜。建议将 RNA 样品稀释 5-10 倍后,取 2 μl 加入 PCR 反应体系,以确保更小的移液误差。
**:引物的终浓度可在 0.1 μM-1 μM 之间调整。
***:请根据 real-time PCR 机器的型号,选择对应的 ROX Reference Dye。
2、进行荧光定量 PCR 反应
3、在适当的qPCR仪器上完成实验,并分析结果。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!