产品详情
DiI (细胞膜红色荧光探针)
规格: 10mg
保存: -20℃干燥避光保存,有效期 1 年。
产品描述:
DiI 即 DiIC18(3) ,全称为 1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanine perchlorate,是最常用的细胞膜荧光探针之一,呈现橙红色荧光。
DiI 是一种亲脂性膜染料,进入细胞膜后可以侧向扩散逐渐使整个细胞的细胞膜被染色。 DiI 在进入细胞膜之前荧光非常弱,仅当进入到细胞膜后才可以被激发出很强的荧光。DiI 被激发后可以发出橙红色的荧光,DiI 和磷酯双层膜结合后的激发光谱和发射光谱:最大激发 波长为 549nm,最大发射波长为 565nm。
DiI 被广泛用于正向或逆向的、活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂 (long-termtracer)。DiI 通常不会影响细胞的生存力(viability)。被 DiI 标记的神经细胞在体外 培养的条件下可以存活长达 4 周,在体内可以长达一年。
具有相同功能的同一族亲脂性的荧光染料还有:DiD,DiO,DiI,DiR 和 DiS,它们的荧 光颜色区分明显:DiI(橙色荧光),DiO(绿色荧光),DiD(红色荧光)和 DiR (深红色 荧光)这使得他们可以用来对活细胞进行多色成像和流式分析。DiI 和 DiO 可以分别用标准 的 FITC 和 TRITC 的滤光片。DiD 可以用 633 nm He–Ne 激光器激发,有着比 DiI 更长的 激发波长和发射波长,在细胞和组织染色中更有价值。 DiR 的红外荧光可以穿透细胞和组 织,在活体成像中用来示踪。
产品性质:
使用方法
1. 染色液制备
(1)配置 DMSO 或 EtOH 储存液:储存液用 DMSO 或 EtOH 配置浓度 1~5 mM。分装储存在-20℃,避免反复冻融。
(2)工作液制备:用适当缓冲液(如:无血清培养基,HBSS 或 PBS)稀释储存液,配制浓度为 1~5 μM 的工作液。
【注】工作液最佳浓度应根据不同细胞系和实验体系来优化。
2. 悬浮细胞染色
(1)加入适当体积的染色工作液重悬细胞,使其密度为 1×106/mL。
(2)37℃孵育细胞 2~20min,不同的细胞最佳培养时间不同。可以 20min 作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记结果。
(3)孵育结束,按 1000~1500 rpm 离心 5min。
(4)倾倒上清液,再次缓慢加入 37℃预热的生长培养液重悬细胞。
(5)重复(3),(4)步骤两次以上。
3. 贴壁细胞的染色
(1)将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。
(2)从培养基中移走盖玻片,吸走过量培养液,将盖玻片放在潮湿的环境中。
(3)在盖玻片的一角加入 100μL 的染料工作液,轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。
(4)37℃孵育细胞 2~20min,不同的细胞最佳培养时间不同。可以 20min 作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记结果。
(5)吸干染料工作液,用培养液洗盖玻片 2~3 次,每次用预温的培养基覆盖所有细胞,孵育 5~10min,然后吸干培养基。
4. 显微镜检测
(1)DiD,DiO,DiI,DiR 和 DiS 滤光器的选择参见表 1。
(2)多色染料的同时检测,滤光器按照以下设定:
a) DiI 和 DiO=Omega XF52,Chroma 51004;
b) DiI 和 DiD=Omega XF92,Chroma 51007;
c) DiI,DiO 和 DiD=Omega XF93,Chroma 61005
5. 流式细胞仪检测
经 DiO,DiI,DiD 和 DiR 染色的细胞可分别用流式细胞仪的 FL1,FL2,FL3 或 FL4 通道检测。
注意事项
1. 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!