产品详情
大鼠脑动脉平滑肌细胞
| 一、细胞基本属性 | |
| 细胞名称 | 大鼠脑动脉平滑肌细胞 |
| 组织来源 | 主动脉组织 |
| 商品货号 | ORCR447 |
| 种属来源 | 大鼠 |
| 产品规格 | 5×105cells/T25细胞培养瓶 |
细胞简介 | 血管疾病发生和发展的一个主要因素是由于血管平滑肌细胞 (smooth muscle cells, SMCs) 转变成为了具有繁殖能力的表型。近期的研究表明平滑肌细胞能表 达钙离子通道 ， ICAM-1和VCAM-1。其中ICAM-1和VCAM-1的表达可能是造成 血管壁炎症反应 ，并进一步造成血管疾病的原因。 因此 ，对血管平滑肌细胞的体 外培养和研究可用来发现和确定新的血管疾病的靶向治疗方法。 |
| 培养基 | 原代平滑肌细胞培养体系 |
| 换液频率 | 每2-3天换液一次 |
| 生长特性 | 贴壁 |
| 细胞形态 | 长梭形、不规则细胞 |
| 传代特性 | 根据细胞特性 |
| 消化液 | 0.25%胰蛋白酶 |
| 培养条件 | 气相：空气 ，95%； CO2 ， 5% |
质量检测：澳睿赛实验室分离的大鼠脑动脉平滑肌细胞经平滑肌肌动蛋白 (α-SMA) 免疫荧光染 色为阳性 ，且不含有HIV-1、 HBV、 HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
大鼠脑动脉平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用澳睿赛配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
二、细胞培养状态
发货时发送细胞电子版照片
三、使用方法
在澳睿赛技术部标准操作流程下 ，建议您收到细胞后尽快进行相关实验。
客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞消化
1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml完全培养基终止消化；
3)用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；
4)待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
3. 悬浮细胞处理
1)收集T25细胞培养瓶中的培养基至50ml离心管中 ， 用PBS清洗细胞培养瓶1 - 2次 ，收集清洗 液；
2) 1200 - 1500rpm离心3min ， 弃上清 ，收集细胞沉淀；
3)加入5ml 新鲜完全培养基 ， 用吸管轻轻吹打混匀 、 分散细胞； 将分散好的细胞调整合适密度接种至培养器皿中 ， 置于37°C 、 5 % CO2 、 饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；
4)若遇到悬浮细胞团块较大 ， 无法机械吹散时 ， 向步骤2)中细胞沉淀添加0 . 25%胰蛋白酶消 化液2m L至离心管中 ， 用吸 - 管轻轻吹打混匀 ，37°C温浴2 - 3 min ， 消化结束后 ， 加入胰酶抑 制剂(或血清)终止消化 ， 用吸管轻轻吹打 ， 分散细胞； 1200rpm离心5min ， 弃上清 ，收集细胞沉淀；
5)加入5ml 新鲜完全培养基 ， 用吸管轻轻吹打混匀； 按传代比例进行接种传代 ，然后补充 新鲜的完全培养基至5m L ， 置于37°C 、 5 % CO2 、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；
6)待细胞状态稳定后 ，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
4. 细胞收货脱落
1)收集所有细胞悬液，1000rpm，离心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min)；消化完向离心管内加入5ml完全培养基终止消化；
3)经1000rpm，离心5min，丢弃上清，用5ml完全培养基(补加1%FBS，促进贴壁)重悬沉淀，接种于新的培养瓶内；
4)待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热)。
5. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验；包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚赖氨酸PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
四、注意事项
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2. 在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。
3. 传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和澳睿赛技术部沟通；由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，详尽告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。
5. 该细胞只可用于科研。
1)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核
2)本产品未通过用于活体诊断的审核
备注：由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同，以上方法仅供各实验室参考
特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
