[1×红细胞裂解液的制备]
1.1用双蒸水(ddH₂O)按10:1稀释红细胞裂解液(10×)的比例,例如,用1mL ddH₂O稀释10 mL红细胞裂解液(9×)。
▲注意事项:请勿用去离子水稀释。
1.2 将制备好的1×红细胞裂解液在室温下储存。在一天结束时丢弃未使用的溶液。
[2 红细胞裂解与洗涤步骤]
2.1.用10体积的1×红细胞裂解液稀释一体积的细胞悬液。
2.2处理血液样本时:涡旋5秒,在室温下孵育10分钟。
▲注意:如果样品在10分钟后不是透明的红色,再孵育2分钟。
处理组织样本时:
涡旋5秒钟,在室温下孵育2分钟。
2.3. 在室温下以 300× g 离心 5 分钟(最多 5 mL 的管)或 10 分钟(15 mL 或 50 mL 管)。完全吸出上清液。
2.4.将细胞沉淀重悬于适当的缓冲液中,然后继续进一步应用。
[3 红细胞裂解无洗涤步骤]
▲ 在流式细胞术分析前对细胞悬液进行荧光染色后,以及不需要缩小体积时,建议使用此程序进行红细胞裂解。
3.1 用 10 体积的 1× 红细胞裂解液稀释一体积的细胞悬液。
3.2涡旋5秒,在室温下在黑暗中孵育10分钟。
3.3 将样品储存在冰上并在一小时内进行分析。