试剂准备
1)次使用前取5ml去离子水加入过硫酸铵(APS)试管中,适当震摇,混匀后置于4℃备用,长期不用建议保存-20℃;
2)根据实验使用制胶模具,分别取需要量1/2体积的分离胶溶液和分离胶缓冲液,加入一个小烧杯中混匀备用;
3)另取一个小烧杯,分别取需要量1/2体积的浓缩胶溶液和浓缩胶缓冲液,混匀后备用;
4)按照1:100比例在前两步制备的分离胶混合液和浓缩胶混合液中分别加入10%APS溶液,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
灌胶操作
1)在凝胶模具中灌入适量上一步骤准备的分离胶混合液;不需要等待立即将上一步骤已准备好的浓缩胶混合液灌入玻璃板中;
2)将梳子插入凝胶内,静置8-15min,等待凝胶聚合。
电泳操作
1)待凝胶聚合后,组装电泳槽,加入电泳缓冲液,小心拔出梳子,检查胶孔并整理梳齿;
2)根据实验需要加入蛋白样品和蛋白分子量标准;
3)调整电泳仪为恒压200-300V,进行电泳操作,约25-35min完成蛋白电泳实验。