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细胞介绍
该细胞是起源于10日龄的ELL-0鸡蛋的鸡细胞株,自发永生化。分离原代鸡胚成纤维细胞并在培养液中培养;传代直到衰老;在衰老过程中离心以保持细胞培养在30%到60%满;不衰老的克隆进行鉴定并传代不少于30次。在软琼脂上没有观察到克隆增殖,说明这些细胞是永生化而没有转化。该细胞可作为病毒增殖、重组蛋白表达和重组病毒生产的基质。
细胞特性
1) 来源:鸡胚
2) 形态:成纤维细胞,贴壁生长
3) 含量:>1x106 细胞数
4) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
5) 用途:仅供科研使用。
运输和保存
干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
细胞接收后的处理
1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代 。
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备DMEM(含NaHCO3 1.5g/L,推荐:(GIBCO,添加NaHCO3 1.5g/L) )培养基;优质胎牛血清,10%;双抗 1%;
注意:细胞冻存后复苏存活率只有50%左右,建议加大冻存密度。该细胞在DMEM(含1.5g/LNaHCO3)培养基中生长良好,大部分品牌的DMEM含有较高浓度的NaHCO3(3.7g/L),若使用DMEM(3.7g/L NaHCO3)培养基培养细胞时需要提高CO2浓度(7%-10%)。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:39℃,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。