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细胞介绍
NCI-N87细胞表达表面糖蛋白癌胚抗原(CEA)和TAG 72, 并且没有左旋多巴胺脱羧酶(DDC)活性。它们的血管活性的肠肽(VIP)受体活性极低并缺乏胃泌激素受体。 它们表达蕈毒碱胆碱受体。没有证据表明存在N-myc, L-myc, myb和EGF受体基因的重组。这个细胞株表达的c-myc和c-erb-B 2 RNA水平与其它细胞株相当。以下基因不表达: N-myc, L-myc, c-cis, IGF-2, 或胃泌激素释放肽。据报道NCI-N87 细胞的植板率为4.3%。
该细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因。
细胞特性
1) 来源:胃癌,肝转移
2) 形态:上皮细胞样,贴壁生长
3) 含量:>1x106 细胞数
4) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
5) 用途:仅供科研使用。
运输和保存
干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
细胞接收后的处理
1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代 。
一.培养基及培养冻存条件准备
1) 准备1640 基础培养基 87 %
优质胎牛血清 10 %
P/S青霉素-链霉素 1%
GlutaMAX-1谷氨酰胺
Sodium Pyruvate丙酮酸钠 1%
注意事项:该细胞贴壁较慢,且生长缓慢,建议复苏、传代后让细胞贴壁48h后再进行后续实验操作。细胞最初将附着形成小岛状,然后在这些密集的斑块中增殖,因此很难正确估计汇合度。避免细胞过密生长,及时更换新鲜培养基,以免培养基的pH受到不利影响。该细胞培养时,在培养基中会有一些漂浮细胞和碎片,并且在该细胞中可能会观察到较大的“囊泡”和颗粒状外观,是正常现象。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。