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不需要辅助酶,延滞时间短 ( <15s) ,线性范围宽 ( 可达2200U /L) ,试剂稳定性好,不使用 KSCN、 NaN3 等激活剂,不受内源性葡萄糖苷酶的干扰,与 EPS法对比相关良好: Y =1.27X +0.50,r =0.9990 |
用亚乙基封闭的 G7-pNP 作底物的酶偶联法 ( EPS法)该法需工具酶,延迟时间长, |
Ga-l G2-α-CNPα-AmyGa-l G2+CNP 连续监测405nm 处 ΔA /min 来反映 CNP 的生成量,从而计算 Amy 的活力 |
日立7060型自动生化分析仪 |
Ga-l G2-α-CNP ( T oyobo) ,α-葡萄糖苷酶 ( T oyobo) ,Bis-T ris ( Sigma) ,其余试剂为国产,分析纯。 对比方法: EPS 试剂盒 ( 宁波慈城生化试剂厂)50mmol/L Bis-T ris/HCl 缓冲液,pH 6.05。 内 含 CaCl2 5 mmol/LNaCl 41mmol/L,Ga-l G2-α-CNP5.0mmol/L。此试剂贮4℃避光保存至少稳定一个月 |
反应类型速率法,主波长405nm,副波长不选,温度37℃,样品体积 ( SV) 5μl,试剂体积 ( T V) 250μl,读数时间3点~10点 ( 相当于39.8秒~179.3秒),计算: 淀粉酶活力( U/L) =ΔA /min×103ε×TVSV=ΔA /min×3497.9CNP 的毫摩尔消光系数[2],pH 6.0,比色皿光径1cm,ε=14.58L·mmol -1·cm- |
由于淀粉酶测定主要用于急诊检验,因本法延迟时间短,线性时间长,线性范围宽,可改为固定时间法,适合于手工操作,也适合于尿液测定。总之,本法不需要辅助酶,不受内源性葡萄糖 苷酶的干扰,延滞时间短,线性范围宽,试剂稳定 性好,不失为测定淀粉酶的理想方法。 |