产品详情
本试剂盒运用双抗体夹心ELISA法定量测定犬血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清液和其他生物液体中犬巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP1β)含量。
实验原理
本酶联免疫吸附测定ELISA试剂盒运用采用双抗体夹心ELISA法。用抗犬巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP1β)抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的犬巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP1β)与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗犬巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP1β)抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗犬巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP1β)抗体与结合在包被抗体上的犬巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP1β)结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,犬巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP1β)浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中犬巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP1β)的浓度。具体参照各指标试剂盒相应的使用说明书。
试剂盒内容
试剂名称 | 数量 | 试剂名称 | 数量 |
96孔板(预包被) | 1 | 96孔板覆膜 | 2 |
标准品 | 0.5ml×1 | 标准品稀释液 | 1.5ml×1瓶 |
显色剂A液 | 6ml×1瓶 | 样品稀释液 | 6ml×1瓶 |
显色剂B液 | 6ml×1瓶 | 终止液 | 6ml×1瓶 |
酶标试剂 | 6ml×1瓶 | 密封袋 | 1 |
浓洗涤液(30×) | 1×20mL | 使用说明书 | 1 |
自备设备与试剂
1. 450±10nm滤光片的酶标仪(建议仪器使用前提前预热)
2. 单道或多道微量加液器及吸头
3. 稀释样品的EP管
4. 蒸馏水或去离子水
5. 吸水纸
6. 盛放洗液的容器
储存与有效期
1. 未开封的试剂盒:所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意,收到试剂盒后请尽快将TMB 洗涤液,终止液保存于4℃,其他试剂保存于-20℃。
2. 使用后的试剂盒:剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存,开封后的酶标板要加干燥剂后密封保存于-20℃,避免潮湿。
注意:
试剂盒内酶标条可拆卸,按实验需求可分多次使用;使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后 1个月内使用完毕。产品过期时间以盒子上的标签为准,保质期内所有组分都确保是稳定的。
采集与保存
1.血清:
将收集于血清分离管的全血标本在室温放置 2 小时或 4oC 过夜,然后 1000×g 离心 20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20oC 或-80oC 保存,但应避免反复冻融。
2.血浆:
用 EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的 30 分钟内于 2-8oC 1000×g 离心 15 分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20oC或-80oC 保存,但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆:
1) 取适量组织块,于预冷PBS(0.01mol/L, pH 7.0-7.2)中清洗去除血液,称重后备用(组织块较大需先剪碎后再匀浆);
2) 可同时选用多种匀浆方法达到较好的破碎效果:首先将组织块移入玻璃匀浆器,加入5-10mL 预冷PBS 进行充分研磨,该过程需在冰上进行(有条件实验室可选用机器匀浆);得到的匀浆液可再利用超声破碎或反复冻融 进一步处理(超声破碎过程中注意冰浴降温;反复冻融法可重复2次)。
3) 将制备好的匀浆液于5000×g 离心5 分钟,留取上清即可检测。
4. 细胞裂解液:
1)贴壁细胞需要先用胰酶消化,离心收集细胞(悬浮细胞可直接离心收集);
2)将收集到的细胞用冷PBS 洗3 次;
3)物理方法裂解细胞(可先超声破碎细胞,再反复冻融):
i 超声破碎:取适量PBS 重悬细胞,用一定功率的超声波处理细胞悬液,使细胞急剧震荡破裂。
ii 反复冻融:将待破碎的细胞在-20 oC 以下冰冻,室温融解,反复3 次,使细胞溶胀破碎。
4)将标本于2-8 oC 1500×g 离心10 分钟,收集上清备用。
5. 细胞培养上清或其它生物标本:
请 1000×g 离心 20 分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20oC 或-80oC 保存,但应避免反复冻融。
注意:
1.以上标本均需密封保存,4oC保存应小于1周,-20oC不应超过1个月,-80oC不应超过2个月。
2.标本使用前应缓慢均衡至室温,不应加热使之融解。
3.实验前红细胞裂解液必须用标准品稀释液稀释。
试剂准备
1.使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温(18-25oC),试剂不能直接在37oC溶解。
2.标准品(冻干品):每瓶标准品加入标准品稀释液1mL,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为2000pg/mL。准备7个稀释标准品的EP管,每个EP管中加入150μL的标准品稀释液,如图依次倍比稀释成不同的梯度,2000pg/mL-1000pg/mL-500pg/mL-250pg/mL-125pg/mL-62.5pg/mL, 标准品稀释液(0pg/mL)直接作为空白孔。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
3.浓洗涤液:用580mL蒸馏水或去离子水将20mL浓洗涤液稀释至600mL,进行30倍稀释。
标本处理
1.本公司只对试剂盒本身负责,不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责,请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量,预留充足的样本。
2.实验前应预测标本含量,如果标本浓度过高,应对标本进行稀释,使稀释后的标本符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。