6min Fast 1st cDNA Synthesis Kit

商品属性：

 产品介绍：

描述：本试剂盒采用稳定高效的反转录预混体系 5×Fast RT MasterMix 进行 RNA 的反转录反应，使用时只需加入模板、 引物和 RNase Free H2O 即可，大大简化了操作过程、提高 了效率、减少了操作过程中的人为误差。 该预混体系包含快速 MLV7 反转录酶、dNTP、反应 Buffer 和 RNase Inhibitor。该试剂盒采用的 MLV7 反转录酶 具有以下特性：RNase H 活性缺失，从而避免反转录过程中 降解 RNA；经过突变文库筛选，使得其热稳定性更强，可耐 受 50℃ 高温反应，在 60℃ 条件下仍然具有 30%以上活性， 利于打开 RNA 二级结构，从而提高复杂 RNA 模板的扩增性 能；含有快速合成结构域，将 MLV 的延伸速度提高了 3-4 倍，因此适用于快速反转录反应；优化的反转录 Buffer 系统， 可以获得更高产量的 cDNA，从而提高后续检测的灵敏度。 合成的第一链 cDNA 可广泛用于 2nd Strand 的合成、杂交、 PCR 扩增、Real-Time PCR 反应等。

应用：

（1）该制品可有效反转录 mRNA、tRNA、LncRNA、ncRNA
（2）该制品不可反转录 microRNA
注意事项：

储存：请置于-20°C，可保存 3 年；避免反复冻融。
1. 按以下组分配制反转录反应液
Total RNA or Poly(A) RNA 0.1-2 μg
5×Fast RT MasterMix 4 μl
*20×Oligo dT(25)&Random Primer 1 μl
Rnase Free H2O Up to 20 μl
*注：反转录引物可根据需要改用特异性引物。
2.反应程序
 50°C 5 min（cDNA 合成）
 95°C 1 min（失活 MLV）
3. 采用 0.25-2μl 反转录产物，作为后续定量 PCR 或 PCR的扩增模板即可。

pcr相关试剂实验结果分析：

PCR实验结果的分析涉及多个方面，‌包括实验操作、‌试剂质量、‌实验条件等，‌这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。‌以下是对PCR实验结果分析的一些关键点：‌

循环次数过多：‌增加模板量减少循环次数，‌缩短退火时间及延伸时间，‌或改用两种温度的PCR循环，‌可以有效避免循环次数过多导致的问题。‌

退火温度过低：‌退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要，‌过低的退火温度可能导致非特异性扩增，‌影响结果的准确性1。‌

电泳体系问题：‌包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、‌凝胶没有凝固好、‌琼脂糖质量差等问题，‌这些都会影响DNA片段的分离效果。‌

试剂盒问题：‌运输储存不当可能引起试剂盒失效，‌试剂盒本身质量问题如引物选择、‌循环参数设置不当也可能导致实验失败1。‌

降解的陈旧模板：‌使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布，‌影响结果的解读1。‌

PCR假阴性结果：‌可能由引物长度不够、‌试剂浓度不标准、‌靶序列突变或缺失、‌循环参数设置错误、‌标本中有Taq酶抑制剂、‌PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。‌

为了获得准确的PCR实验结果，‌需要注意以下几点：‌

确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。‌

在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测，‌以便及时对反应条件进行调整。‌

防止样本的污染和交叉感染，‌以免影响PCR反应的准确性和可靠性。‌

通过上述分析，‌可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素，‌从而提高实验结果的准确性和可靠性。‌

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