产品详情
pUC57 Simple TA/平端通用克隆载体
商品属性:
货号 | 规格 | 产品名称 |
P-PR1322-20T | 20T | pUC57 Simple TA/平端通用克隆载体 |
产品介绍:
描述:pUC57 Simple 通用克隆载体采用了 TOPO 酶连接技术,载体预先偶联上 TOPO 酶,当加入 PCR 扩增产物后,5 min 就可以完成连接反应,连接阳性率高。pUC57 Simple 通用克隆载体消除了大部分的常用酶切位点,便于后续亚克隆。该产 品适用于 Taq 酶扩增的含“A”尾巴和高保真酶扩增的 PCR 产物的连接,载体含有氨苄青霉素抗性筛选标记。
注意:RTS DH5α 冻干感受态在未溶解状态下,可于-20℃长期保存(>2 年),已经溶解后,请-60℃以下保存(3 个月)。
操作方法:
1. PCR 产物的纯化
1.1 PCR 扩增完毕后,电泳检测产物,如无非特异性扩增、无引物二聚体、条带单一明亮,则可采用 PCR 产物纯化试剂
盒纯化后用于连接。产物不经纯化也可以进行连接,但效果稍差一些。
1.2 PCR 扩增完毕后,电泳检测产物,如有非特异性扩增条带或引物二聚体,则必须采用胶回收后用于连接。
1.3 PCR 扩增模板来源于 Amp 抗性质粒,则必须采用胶回收后用于连接。
2. PCR 用量和连接时间
PCR 产物大小 PCR 产物用量 载体用量 摩尔比 连接时间 阳性率
0.1~1kb 2~10ng 1 μl 1: 5~10 5~10min >95%
1~3kb 10~20ng 1 μl 1: 5~10 15~20min >90%
>3kb 5ng/kb 1 μl 1: 5~10 30min >85%
3. 连接反应
向 0.2 ml EP 管中依次加入如下试剂
成 分 用 量
PCR 产物 0.5~4 μl (用量参考上表)
pUC57 Simple Vector 1 μl
加无菌水至总体积为 5 μl
轻轻吹打混合均匀后,室温(25°C)孵育 5~30min,通常放置 10min。
关于 PCR 产物的用量说明:在 PCR 产物回收后(在无法进行 NanoDrop 测定浓度的情况下),按照一般的经验可估算产物
的用量,原则为:3 μl 回收产物在琼脂糖凝胶电泳后,可清晰判断的情况下,使用 0.5~1 μl 回收产物(约 5~15 ng)进行连
接即可。回收产物难以观察的情况下使用 4 μl 回收产物(约 5~10 ng)进行连接。使用过高量的 PCR 产物将会导致连接效
率低下,长斑数量和阳性率急剧下降。
主要特征
(1)快速连接,最快仅需 5min;(2)操作简单,仅需加入载体和片段即可;(3)无需蓝白斑筛选,阳性率高;(4)不包含
任何酶切位点,便于后续亚克隆(5)平末端和 A 尾产物通用。
注意:引物不能磷酸化。
测序引物
正向测序引物:M13F(-47): 5’- CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC-3’;
反向测序引物:M13R(-48): 5’- AGCGGATAACAATTTCACACAGGA-3’;
pcr相关试剂实验结果分析:
PCR实验结果的分析涉及多个方面,包括实验操作、试剂质量、实验条件等,这些因素都会影响PCR实验的成功率和结果的准确性。以下是对PCR实验结果分析的一些关键点:
循环次数过多:增加模板量减少循环次数,缩短退火时间及延伸时间,或改用两种温度的PCR循环,可以有效避免循环次数过多导致的问题。
退火温度过低:退火温度的适当调整对于PCR反应的成功至关重要,过低的退火温度可能导致非特异性扩增,影响结果的准确性1。
电泳体系问题:包括凝胶中缓冲液和电泳缓冲液浓度相差太大、凝胶没有凝固好、琼脂糖质量差等问题,这些都会影响DNA片段的分离效果。
试剂盒问题:运输储存不当可能引起试剂盒失效,试剂盒本身质量问题如引物选择、循环参数设置不当也可能导致实验失败1。
降解的陈旧模板:使用降解的陈旧模板进行扩增容易产生涂布,影响结果的解读1。
PCR假阴性结果:可能由引物长度不够、试剂浓度不标准、靶序列突变或缺失、循环参数设置错误、标本中有Taq酶抑制剂、PCR产物检测系统灵敏度不够等因素引起。
为了获得准确的PCR实验结果,需要注意以下几点:
确保PCR反应体系中各种试剂的配比和操作步骤的精准度。
在PCR反应过程中需要对PCR产物进行实时监测,以便及时对反应条件进行调整。
防止样本的污染和交叉感染,以免影响PCR反应的准确性和可靠性。
通过上述分析,可以更好地理解和控制PCR实验中的关键因素,从而提高实验结果的准确性和可靠性。
公司正在出售的产品:
冰冻切片神经纤维荧光染色(PGP9.5)试剂盒 | 双重特异性磷酸酶27抗体 DUSP27 |
小鼠雌三醇(E3)elisa检测试剂盒 | 丝氨酸蛋白酶抑制剂SPINK6抗体 SPINK6 |
组织脂质过氧化物(MDA)活性TBARS比色法定量检测试剂盒 | PE-Cy7标记小鼠CD45单克隆抗体 mouse CD45/PE-Cy7 |
骨组织蛋白提取试剂盒100T | 磷酸鞘氨醇裂解酶1抗体 SGPL1 |
人白介素-1(IL-1)elisa检测试剂盒 | 绿色荧光蛋白抗体 GFP |
组织亚硝酸盐含量比色法定量检测试剂盒 | PE标记人CD86单克隆抗体 human CD86/PE |
磷酸化白细胞介素-10受体a抗体 phospho-IL10RA (Ser319 + Ser323) | FAM83H蛋白抗体 FAM83H |
磷酸化核仁磷酸蛋白抗体 Phospho-NPM (Thr95) | EXOC7蛋白抗体 EXOC7 |
锌指转录蛋白SALL2抗体 SALL2 | 大鼠抗增殖细胞核抗原(PCNA)抗体elisa分析检测试剂盒 |
嗅觉受体5D13抗体 OR5D13 | 蛋白磷酸酶3调节亚基B抗体 PPP3CB |
大肠癌肿瘤突变蛋白抗体 MCC | 猪热休克蛋白70(HSP-70)elisa检测试剂盒 |
线粒体核糖体蛋白L51抗体 MRPL51 | 香叶烯基转移酶1β抗体 PGGT1B |
饮料镁离子浓度酶反应光谱法定量检测试剂盒 | 核受体TR2抗体 NR2C1 |
山羊补体蛋白3(C3)elisa分析检测试剂盒 | 坏死因子配体超家族成员9抗体 TNFSF9 |
胱抑素C单克隆抗体(包被) Cystatin-C(8F14) | pUC57 Simple TA/平端通用克隆载体丙型肝炎病毒NS5A/Hepatitis C Virus NS5抗体 HCV NS5a |
猪乙脑病毒(JEV)NS1蛋白抗体 JEV NS1 | 半乳糖凝集素7抗体 Galectin 7 |