产品详情
商品属性:
产品名称 | A2780+GFP人卵巢癌细胞+GFP | 鉴定 | STR鉴定 |
种属 | 人 | 货号 | A01X641 |
温度 | 液氮 | 细胞形态 | 上皮细胞样 |
英文名称 | A2780+GFP:A2780GFP | 生长特性 | 贴壁生长 |
细胞详情:细胞介绍
该细胞通过慢病毒转染的方式携带GFP基因。
细胞特性
1)来源:卵巢
2)形态:上皮细胞样,贴壁生长
3)含量:>1×10⁶ 细胞数
4)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
5)用途:仅供科研使用。
运输和保存
干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
细胞接收后的处理
1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10X,20X)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代。
一.培养基及培养冻存条件准备
1)准备RPMI-1640培养基;优质胎牛血清+10%;GlutaMAX-1谷an酰胺+1%;P/S双抗+1%
2)培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二、细胞处理:
1)冻存细胞的复苏:
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:
1、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2、加入0.25%(w / v)胰dan白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3、轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3)细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例:
1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml.
2、1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
使用范围
本产品仅限于科学研究,绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。
细胞处理:
1) 冻存细胞的复苏:
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3. 轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3)细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
下面T25瓶为例;
1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10^6~1×107个活细胞/ml.
2. 1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×10^6~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
细胞系操作步骤:
(1) 细胞系培养:取6cm细胞皿,向每孔中加入2mL含1~2×105个细胞培养液,37℃ CO2培养密度至40%~60%,密度过大,转染后不利筛选细胞。
(2) 转染液制备:在EP管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量)
A液:用不含血清培养基稀释1ug 质粒DNA。
B液:用不含血清培养基稀释2ul脂质体。
分别将A液与B液轻弹混匀,静置5分钟。
(3) 吸取B液加入至A液中,轻弹混匀。室温中置10-15分钟。
(4) 转染准备:用1mL不含血清培养液漂洗两次,再加入4mL不含血清培养液。
(5) 转染:把A/B复合物缓缓加入培养液中,摇匀,37℃温箱置6~24小时,吸除无血清转染液,换入正常培养液继续培养。
(6) 瞬时转染后,可在48h-72h细胞长满之后,提取细胞蛋白或者RNA,验证敲减/过表达效率。
公司正在出售的产品:
大鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞 | 人抗丁型肝炎病毒抗体(anti-HDV)检测试剂盒elisa |
A2780人卵巢癌细胞 | 人热稳定抗原(HSA/CD24)试剂盒ELISA |
EL4 (小鼠淋巴瘤细胞) (种属鉴定正确) | 大鼠雄烯二酮(ASD)试剂盒 ELISA |
F9 (小鼠畸胎瘤细胞/小鼠胚胎癌细胞) (种属鉴定正确) | 肝片吸虫病通用PCR试剂盒 |
3T3-L1 (小鼠胚胎成纤维细胞) (种属鉴定正确) | 螺旋体通用PCR试剂盒 |
4T1 (小鼠乳腺癌细胞) (STR鉴定正确) | 侵肺巴斯德菌PCR检测试剂盒 |
A9 (小鼠皮下结缔组织细胞) (种属鉴定正确) | 传染性肌肉坏死病病毒PCR检测试剂盒 |
LM/TK (LMTK-) (小鼠胸腺激酶缺陷细胞) (种属鉴定正确) | 副百日咳波氏杆菌PCR试剂盒 |
MA-782 (小鼠乳腺癌细胞) | 兔附红细胞体(兔嗜血支原体)PCR试剂盒 |
B16 (小鼠黑色瘤细胞) (种属鉴定正确) | 腺病毒PCR检测试剂盒 |
BNL CL.2 (小鼠胚胎肝细胞) (种属鉴定正确) | 奋森疏螺旋体(奋森包柔螺旋体)PCR试剂盒 |
C127 [C-127] (小鼠乳腺肿瘤细胞) (种属鉴定正确) | 粪产碱杆菌PCR检测试剂盒 |
C2C12 (小鼠成肌细胞) (种属鉴定正确) | 腺伴随病毒PCR检测试剂盒 |
CT26.WT (小鼠结肠癌细胞) (种属鉴定正确) | A2780+GFP人卵巢癌细胞+GFP鸽痘病毒PCR检测试剂盒 |
EAC (小鼠艾氏腹水癌细胞) | 型纤溶mei原激活剂受体ELISA试剂盒 |