T4 RNA连接酶1(T4 RNA Ligase1)催化3’→5’磷酸二酯键的形成，使核苷酸的5’-磷酸末端和3’-羟基末端连接，伴随着ATP水解为AMP和PPi。

应用

连接单链RNA和DNA

RNA 3’末端标记

RNA和DNA分子内和分子间连接

单位定义

• 1单位指在1×T4 RNA Ligase Buffer 中，37℃条件下，30分钟内将1nmol的5’-[32P]rA16转化为磷酸盐不溶物质所需要的酶量。

储存

-20°C可保存3年，避免反复冻融。

注意事项

（1）1× T4 RNA Ligase Buffer：50 mM Tris-HCl pH 7.5，10 mM MgCl2，1 mM DTT。该酶反应时需要加入终浓度1 mM ATP。

（2）最佳反应温度37℃，65℃ 10min可使该酶失活。

（3）该酶的连接底物无论是ssDNA还是ssRNA均需要5’-磷酸化或预腺苷化。

（4）该酶不能连接双链DNA或RNA。

（5）加入终浓度20% PEG 8000或增加孵育时间可提高连接效率。