产品名称：藻类蛋白提取试剂盒（2D电泳用）

产品规格：50T

膜蛋白承担各种生物功能，扮演重要角色。膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析及质谱分析等应用配套，因此膜蛋白样本制备成为一个难以逾越的挑战。传统制备膜蛋白样品的方法是使用去污剂和表面活性剂增溶。去污剂处理会使膜蛋白丧失其天然结构，因而妨碍了膜蛋白的功能研究。 藻类膜蛋白提取试剂盒（二维电泳用）是一种基于化学方法的高产膜蛋白提取试剂盒。藻类膜蛋白提取试剂盒可以从各种藻类中提取膜蛋白，包括各种真核藻类和蓝藻门的原核藻类，各种大型藻类和微藻。也可用于纯化膜蛋白的粗品制备及膜蛋白制备。提取过程简单方便。该试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物和磷酸酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白样品不含盐，可以直接用于双向电泳。如需要用于报告基因检测、SDS-PAGE电泳检测、Western blotting、凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活分析等下游实验的试剂盒。

藻类蛋白提取试剂盒（2D电泳用），使用方法

1. 提取液准备：

每500μl冷的蛋白提取液A中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

每500μl膜蛋白溶解液C中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

2. 取5-10×106个以上细胞，在4℃，500×g条件下离心3-5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。

3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

4. 细胞样品中加入200μl-400μl冷的试剂 A，充分混匀。

5. 在2-8℃条件下振荡20-30分钟，至细胞充分裂解，细胞沉淀明显减少。

6. 在4℃，12000×g条件下离心5分钟。

7. 将上清吸入另一干净离心管，在37℃水浴5-10分钟。

8. 在37℃，1000×g力离心5分钟，此时溶液分为两层，下层是膜蛋白约为30-50μl。

9. 小心移除上层液体，收集上层部分留作备用分析。

10. 用150-200μl冰冷的试剂B充分溶解下层膜蛋白部分，混匀后冰浴2分钟，37℃水浴5-10分钟，37℃，1000×g力离心5分钟，此时溶液分为两层，下层是膜蛋白约为30-50μl。小心移除上层液体，保留下层。

11. 按以上步骤再次抽提下层膜蛋白(此步骤可以选做，一般不需要做)。

12. 用50-200μl冷的试剂C膜蛋白溶解液溶解下层膜蛋白部分，即得膜蛋白。

13. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

使用注意事项：

1旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2 蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

4 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

5 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

6 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

7下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。

藻类蛋白提取试剂盒（2D电泳用），注意事项

1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。

2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3.试剂拆封后请尽快使用完！

保存温度2-8℃

保质期1年

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