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人椎间盘纤维环细胞
细胞原代培养原理和应用:
细胞原代培养是通过特殊分离方法从胚胎、组织器官以及外周血中分离获得单细胞,置于合适的培养基中培养,在无菌、适当温度和一定条件下,使细胞生存、生长和繁殖的过程。原代培养的“代”并非细胞的代数,是指细胞培养的次数,从体内取出组织接种培养到第一次传代的阶段,都属原代培养,一般持续1-4周。
人椎间盘纤维环细胞原代培养细胞直接来源于活体组织,体外培养也尽量模拟体内环境,使得分离得到的细胞接近生物体内的生活状态,可作为研究生物体细胞的生产、代谢、繁殖、凋亡提供有力手段,亦可用于各种药理作用、药物开发研究和临床实践。
原代细胞的质量取决于多个因素:取材、培养条件的优化、无菌操作,特别是组织分离技术等。对于大多数研究者而言,想要获得高质量的原代培养细胞仍然比较困难。尽管原代培养技术已较普遍,但是有时仍会得到一些难以解释的结果。公司拥有行政许可的洁净级实验动物中心,已构建细胞培养和实验平台,可分离培养数百种人、大小鼠和大型动物的原代细胞,并在此基础上提供相关细胞实验服务,包括细胞培养、细胞转染以及细胞药物刺激后各种增殖、侵染和凋亡实验。如果在细胞实验上有任何困难,即可联系我们,我们很乐意提供帮助。
细胞简介:
人椎间盘纤维环细胞分离自椎间盘组织;椎间盘是位于脊柱两椎体之间,由软骨板、纤维环、髓核组成的一个密封体。上下有软骨板,是透明软骨复盖于椎体上,下面骺环中间的骨面。上下的软骨板与纤维环一起将髓核密封起来。纤维环由胶原纤维束的纤维软骨构成,位于髓核的四周。纤维环的纤维束相互斜行交叉重叠,使纤维环成为坚实的组织,能承受较大的弯曲和扭转负荷。纤维环的前侧及两侧较厚,而后侧较薄。纤维环的前部有强大的前纵韧带,后侧的后纵韧带较窄、较薄。纤维环细胞密度为9000个细胞/mm3,其外层的细胞呈梭型,主要属于纤维细胞,内层细胞呈圆形,主要属于软骨细胞。在培养的情况下,用透射电镜观察则有许多共同的超微结构表现,它们的核较圆,核仁较明显。细胞质内可见大量的附有核糖体颗粒的粗面内质网和滑面内质网。细胞质内线粒体多,为椭圆形,有的可看到双层单位膜,由单位膜包绕初级深酶体和次级深酶体。细胞质内有一系列的扁平囊及小泡主成的高尔基复合体和分泌颗粒,纤维环细胞合成分泌蛋白多糖及胶原纤维的能力很旺盛,保证纤维环生理代谢活动所需的构造物质的供给。一但这种供给减少,纤维环的生物性能就会减弱,椎间盘开始退变。
商品属性:
产品名称 | 人椎间盘纤维环细胞 | 组织来源 | 椎间盘组织 |
产品规格 | 5×105cells/T25细胞培养瓶 | 生长特性 | 贴壁 |
细胞形态 | 梭形、多角形 | 用途 | 仅供科研研究实验 |
方法简介:
公司实验室分离的人椎间盘纤维环细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化法并结合软骨细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测:
公司实验室分离的人椎间盘纤维环细胞经Ⅰ型胶原蛋白免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养信息:
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 梭形、多角形
传代特性 可传5代左右;3代以内状态最佳
消化液 0.25%胰蛋白酶
培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%
注意事项:
① 细胞培养、传代以及冻存需要严格的无菌操作。
② 传代时需要适度的消化,消化的时间受消化液的种类、配制时间、加入培养瓶中的量等诸多因素的影响,消化过程中应该注意培养细胞形态的变化,一旦胞质回缩,连接变松散,或有成片浮起的迹象就要立即终止消化。
③ 传代应在细胞处于对数期、未达到汇合状态时进行。
④ 细胞冻存液需提前配制,不可直接将DMSO加入细胞悬液中。
⑤ 应选择汇合度80%-90%左右,并且活力达90%以上处于对数生长期时的细胞进行冻存操作,确保细胞冻存时状态最佳,冻存密度可根据细胞特性进行调整。
⑥ 程序冻存盒、细胞冻存液、完全培养基等试剂都要复温至室温备用。
⑦ 冻存前注意切勿消化时间过长、吹打力度过重、离心转速过大或离心时间过长,以免造成细胞损伤。
⑧ 冻存管的盖子一定要拧紧,否则水浴复苏时水会渗入造成污染。
⑨ 细胞不可长期保存在-80℃冰箱中,放置时间不要超过3天。
⑩ 液氮或冰箱距离细胞房较远,细胞需要放在干冰或冰盒上运送至细胞房。
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