QuantiFast Probe PCR Kit定量PCR试剂盒使用序列特异性探针进行快速两步法RT-PCR,适用于基因表达分析
快速获得结果,节约多达60%的时间
灵敏的检测低拷贝模板
准确检测各种起始量的模板
优化的即用型预混液用于快速PCR反应
通用的操作流程适用于标准和快速的PCR仪
QuantiFast Probe PCR Kits利用序列特异性探针,可对cDNA进行快速、灵敏的两步法real-time PCR定量检测。Q-bond技术和优化的预混液使real-time RT-PCR的运行时间缩短,不仅在快速PCR仪上,即使在普通PCR仪上也可快速完成反应。即用型预混液含有热启动酶和独特的PCR缓冲液,确保在任何real-time PCR仪上无需优化即可进行灵敏的定量PCR检测。提供两种试剂盒规格。对于需要ROX进行荧光校准的PCR仪,可选择QuantiFast Probe PCR Kit。对于其他PCR仪,可选择QuantiFast Probe PCR +ROX Vial Kit。为了便于使用,预混液可保存在2–8°C。
性能
QuantiFast Probe PCR Kits可获得高灵敏度结果,优于其它real-time PCR试剂盒。 可缩短60%的PCR运行时间,更快获得结果,不影响PCR反应效果。可以明显提高您的样品通量,您也可以同其他用户共用PCR仪。
平均CT 值 | ||
---|---|---|
人类白血球cDNA (ng) | QuantiFast Probe PCR +ROX Vial Kit | BV供应商的试剂盒 |
100 | 29.13 | 31.13 |
10 | 32.50 | 34.43 |
1 | 36.15 | 40.00 |
无模板对照 | 40.00 | 40.00 |
QuantiFast Probe PCR Kits可在大范围内进行准确的定量检测。可靠检测稀释倍数高达7个数量级的模板稀释液(参见"Detection over 7 logs of template in two-step RT-PCR on the LightCycler 2.0 "和"Detection over 7 logs of template")。
平均CT 值 | ||
---|---|---|
人类白血球cDNA | QuantiFast Probe PCR +ROX Vial Kit | R供应商的试剂盒 |
100 ng | 11.99 | 14.56 |
10 ng | 15.54 | 17.99 |
1 ng | 19.22 | 22.16 |
100 pg | 22.63 | 25.14 |
10 pg | 26.43 | 30.15 |
1 pg | 30.02 | 34.43 |
100 fg | 33.42 | 37.10 |
无模板对照 | 40 | 40.00 |
PCR效率 | 90% | 80.1% |
原理
QuantiFast Probe PCR Kits可在大范围内进行快速、灵敏的定量检测,适用于标准和快速PCR仪。该试剂盒专为各种序列特异性探针设计,包括水解探针(TaqMan探针和其他双标记探针)和FRET探针。特制的快速PCR缓冲液包含新型Q-Bond成分,可大大缩短变性、退火和延伸时间。缓冲液中K+和NH4+离子的平衡配比可促进特异性的引物退火,确保高度灵敏和特异的RT-PCR反应。此外,HotStarTaq Plus DNA Polymerase需要严格的热启动,可避免生成非特异性产物。
成分 | 特点 | 优势 |
---|---|---|
HotStarTaq Plus DNA Polymerase | 95oC加热3分钟活化 | 在室温进行qPCR反应体系构建 |
QuantiFast Probe PCR Buffer | 平衡的NH4+和K+离子配比 | 引物探针的特异性结合确保获得可靠结果 |
独特的Q-Bond添加剂 | PCR运行时间缩短,更快获得结果,一天内可完成更多PCR反应 | |
ROX染料? | 对Applied Biosystems和Agilent PCR仪进行荧光信号的校准 | 对需要ROX染料的PCR仪进行校准,不影响PCR反应结果 |
操作流程
QuantiFast Probe PCR Kits包含即用型预混液,无需对反应和扩增条件进行优化。只需按照操作手册进行实验,即可快速获得可靠的结果。提供含有和不含ROX染料的预混液(参见下表)。由于ROX浓度经优化,即使是低拷贝数也可通过数据自动分析进行检测。
ROX染料 | 试剂盒 | 适用的PCR仪 |
---|---|---|
混合在预混液中 | QuantiFast Probe PCR Kit | 除Applied Biosystems 7500外的所有Applied Biosystems仪器 |
单独装在管中 | QuantiFast Probe PCR +ROX Vial Kit | Applied Biosystems 7500、Agilent、Bio-Rad、Cepheid、QIAGEN、Eppendorf、Roche和其他供应商的PCR仪 |
为获得两步法real-time RT-PCR结果,我们推荐应用QuantiTect Reverse Transcription Kit合成cDNA。该试剂盒可在20分钟内快速合成cDNA,同时去除基因组DNA。
QuantiFast Probe Assays是预制的适合全基因组的试剂,使用水解探针法检测;包含在QuantiFast Probe PCR Kit中,可确保在两步法qRT-PCR中获得可靠结果。
应用
QuantiFast Probe PCR Kits可在任何real-time PCR仪上利用序列特异性探针进行cDNA基因表达分析。适用于Applied Biosystems、Bio-Rad、Cepheid、Eppendorf、Roche和Agilent的PCR仪。在Rotor-Gene Q实时荧光定量PCR分析仪或其他Rotor-Gene PCR仪上使用时,我们推荐使用专为快速PCR研发的Rotor-Gene Probe PCR Kit。
QuantiFast Probe PCR Kit定量PCR试剂盒
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