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国家药典委员会发布公告,《中国药典》2020年版第一增补本已编制完成,将于2024年3月12日正式实施。本篇对生物制品新增指导原则中“9405 糖蛋白的糖基化分析指导原则”的相关内容进行梳理,并为广大客户提供岛津的应对方案。下图为指导原则框架。糖蛋白的糖基化是通过糖基受体、糖基供体和糖基转移酶三类分子的协同作用将单糖或寡糖以糖苷键形式连接在蛋白质的氨基酸残基上,是蛋白质的一种翻译后修饰。本指导原则阐述了糖蛋白糖基化分析的理念、方法及应用和验证的相关要求。图1为糖基化分析的决策框架图。糖基化分析流程通常为一个多步骤的过程,必要时还需要进行前处理(糖蛋白分离和纯化)以去除干扰因素(如辅料、盐等)。按照完整糖蛋白分析、糖肽分析、寡糖分析、单糖分析等4种不同的互补分析方法,完成糖基化分析的全部流程。糖蛋白N-糖基化和O-糖基化分析流程可参见图2。1完整糖蛋白分析:提供关于糖蛋白糖基化分布等总体信息2) 糖基化导致的蛋白质分子量迁移:聚丙烯酰胺凝胶电泳法、毛细管电泳法4) 唾液酸修饰程度:高效液相色谱法、离子色谱法、等电聚焦电泳法、毛细管电泳法2糖肽分析:提供特定糖基化位点的糖基化类型、占有率、寡糖结构信息1) 糖肽富集或分离:反相/亲水高效液相色谱法、毛细管电泳法3寡糖分析:提供多种寡糖类型的结构以及相对含量的信息1) 非衍生寡糖的分离与分析:高效阴离子色谱法、多孔石墨化碳色谱法、质谱法2) 衍生寡糖的分离与分析:色谱法、毛细管电泳法、质谱法(荧光标记衍生、紫外标记衍生、全甲基化衍生)1) 非衍生单糖的分离与定量分析:比色法、高效阴离子色谱法、多孔石墨化碳色谱法、质谱法2) 衍生单糖的分离与定量分析:反相色谱法、离子交换色谱法、气相色谱法、毛细管电泳法、荧光或紫外检测法中国药典2015版和2020版提出了糖基化的重要性,有部分具体方法,但缺乏糖基化分析指导原则。本新增指导原则从完整糖蛋白分析、糖肽分析、寡糖分析、单糖分析4个方面详细收载了前处理方法及检测方法,指导如何选择适当的方法完成良好的糖基化分析。岛津不断开发新方法,持续推出满足药典指导原则的应用方案。1台式 MALDI-TOF MS 应用于糖蛋白质分子量测定3利用Q-TOF结合荧光检测器分析2-AB标记N糖
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