方案摘要
方案下载应用领域 | 生物产业 |
检测样本 | 其他 |
检测项目 | |
参考标准 | Q Exactive 系列高分辨质谱平台 |
基于 Orbitrap 技术的 Q Exactive Plus Biopharma 质谱平台,在完成常规肽图分析、变性质谱条件下测定蛋白分子量的同时,还可以与体积排阻色谱串联,方便快捷的测定非变性条件下 ADC 样品,尤其是 Cys 偶联样品的分子量。
随着生物制药工业的发展,通过将单克隆抗体本身的二硫键打开,由此在半胱氨酸的自由巯基上偶联小分子药物的 ADC 越来越多。由于此类 ADC 分子链间的二硫键被打开,其轻/重链之间仅靠非共价键结合,在传统的变性质谱条件下会解离成抗体片段,无法测定完整蛋白的分子量。非变性质谱(Native MS)是一种近年来得到不断发展和推广的新兴分析技术,可以在保持蛋白非共价作用力条件下进行分子量测定,采用非变性质谱进行 cysteine-linked ADC 分析显示了强大的应用潜力。
Thermo ScientificTM Q ExactiveTM Plus Biopharma 平台质谱仪保持了 Orbitrap 超高分辨质谱平台的固有优点,如高分辨率、高质量精度和高灵敏度兼具,在此基础上又对其 mass range 做了进一步扩展,新增的 High Mass Range Mode(HMR Mode)m/z 上限可至 8000 Da,同时又针对高质量端离子传输进行了优化,进一步提高了高质量端离子的传输效率,并改进了 HCD 的压力调节。该平台包括三种不同分析模式(Standard Mode、Protein Mode 及 HMR mode),可覆盖生物制药领域的表征全流程。
在本实验中,我们在 Q Exactive 系列高分辨质谱平台上,分别采用变性质谱条件和非变性质谱条件,对 Cys 偶联的 ADC 和与之对应的 mAb 样品进行了分子量测定。在变性质谱平台上,mAb 的分子量可以得到精确解析,ADC 样品由于其非共价结合被破坏,被检测到的主要是 1/2ADC 形式,可观察到其典型的糖型与小分子药物偶联分布。
在非变性质谱实验中,将体积排阻色谱与 Q Exactive Plus Biopharma 高分辨质谱平台联用,使用其专为完整蛋白分析所设置的 HMR(High Mass Range)模式对 ADC 及 mAb 样品进行分子量测定,可在保持 ADC 非共价结合的状态下测定其分子量与糖型、偶联不同药物的分布;实验中使用了 17500/35000 两档分辨率,发现随着分辨率的提高,可以将样品峰与杂质峰分离开,从而更准确的测定样品分子量。
通过本实验不难得知,基于 Orbitrap 技术的 Q Exactive Plus Biopharma 质谱平台,在完成常规肽图分析、变性质谱条件下测定蛋白分子量的同时,还可以与体积排阻色谱串联,方便快捷的测定非变性条件下 ADC 样品,尤其是 Cys 偶联样品的分子量。
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