方案摘要
方案下载应用领域 | 制药/生物制药 |
检测样本 | 中药材和饮片 |
检测项目 | 含量测定>色谱法, 质谱法 |
参考标准 | 国标 |
本实验采用Orbitrap ID-X Tribrid MS高分辨液质联用技术,结合Compound Discoverer软件中的代谢物分析工作流程,对中药柴胡体外肠内菌代谢物进行了快速准确的分析。Compound Discoverer内置I相+II相代谢途径,针对已知和未知代谢物开采用质量亏损过滤(MDF),碎片离子搜索策略(FISh),特征同位素,共有碎片检索等方式,寻找代谢物;同时软件提供多种统计学工具,通过不同给药时间点或不同处理方式统计学差异,确证代谢物。选择柴胡中鉴定到的代表性物质柴胡皂苷A和绿原酸为母药,在孵育基质样品中柴胡皂苷A正离子模式共鉴定出14种可能的代谢物,负离子模式鉴定出11种可能的代谢物;绿原酸共鉴定出5种可能的代谢物。
传统中药以口服用药为主,其化学成分受胃肠道酸碱性、肠道微生 物及代谢酶等影响常发生转化,使其生物利用度降低,体内除中药 原形成分外,还可能有大量代谢产物的存在,这些体内吸收化学 成分是阐明中药发挥药效机制的直接物质基础。要想揭示中药体内 药效物质,代谢产物研究是不可缺少的重要组成部分,尤其是苷类 及其他结构易转化的化学成分(如萜类等),其生物利用度较低, 在体内主要以代谢产物的形式存在,在此种情况下,代谢产物可能 是药效的唯一或主要来源[1]。然而,由于中药成分的代谢规律不明 确、代谢产物含量低难以鉴定等原因,大大制约了中药体内药效物 质基础的研究。
为了更加深入的研究中药体内药效物质基础,需要利用高分辨质谱 对中药体内代谢物进行更深度的鉴定分析。然而由于中药体内的代 谢物通常含量很低,且同时受到基质背景的干扰,传统LC Q-TOF MS高分辨质谱的DDA数据采集模式难以获得低含量代谢物的二级 质谱图用于结构鉴定。新一代Orbitrap ID-X Tribrid三合一质谱仪由 于具有Acquire X智能化数据采集模式,自动迭代生成排除列表及 包含列表,可以获得极低含量组分的多级质谱用于代谢物的深度分 析。
柴胡Bupleuri Radix为伞形科植物柴胡(又称北柴胡)Bulpeurum chinese DC. 和狭叶柴胡(又称南柴胡)Bulpeurum scorzonerifolium Willd的干燥根,其性味苦凉、微寒,具有解表和里、疏肝解 郁、升举阳气之功效[2]。柴胡化学成分复杂,其中皂苷类、挥发油 类、黄酮类为柴胡的主要活性成分,具有免疫调节、抗抑郁、保 肝、抗肿瘤、解热抗炎等药理作用[3-5]。近年来,液相色谱-质谱联 用技术(LC-MS)的成熟与发展已被应用于柴胡皂苷类组分的代谢研究[6,7]。然而,单个活性组分的代谢研究以及部分代谢物的鉴定结 果仍然无法全面综合的评价柴胡的质量和体内药效物质基础。
本实验采用离体实验的代谢研究方法,通过具有AcquireX采集功能 的Orbitrap ID-X Tribrid MS技术对柴胡代谢产物进行整体分析。首先 用富含肠内菌的粪便悬浮液与柴胡提取物在厌氧条件下温孵,利用 Compound Discoverer 3.0代谢物分析软件对采集的高分辨质谱数 据进行解析,最终构建柴胡的肠内菌代谢指纹图,以期为中药的临 床合理应用奠定理论基础。
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