食品中糖化酶的测定

2019-05-05 19:21  下载量:1

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实验二 糖化酶的制备 一、实验目的 学习并掌握黑曲霉发酵产生糖化酶的基本原理及操作方法。 二、实验原理 糖化酶又称葡萄糖淀粉酶 (glucoamylase, EC 3.2.1.3),其作用方式不像α-淀粉酶那样无作用次序,而是从底物链的非还原性末端开始,顺次切下一个个葡萄糖单位,遇到分支处的α-1,6糖苷键时,可将α-1,6糖苷键切开,然后继续作用α-1,4糖苷键,直到产物全部成为葡萄糖为止。但糖化酶对α-1,6糖苷键的作用速度远不及对α-1,4糖苷键的作用速度,因此水解支链淀粉多的淀粉时,需延长水解作用时间或添加部分支链淀粉酶。 我国糖化酶的生产主要由黑曲霉优良菌种经深层发酵精制提炼而成。本实验利用黑曲霉具有多种活力较强酶系的特点,利用淀粉类物质为原料,获得制备淀粉水解糖所需的糖化酶。 三、实验材料 1. 菌种:黑曲霉(Aspergillus niger) 2. 仪器:洁净工作台、灭菌锅、振荡培养箱、高速冷冻离心机、高压灭菌锅 四、实验步骤 实验流程:保藏菌种菌株活化及平板扩大培养摇瓶培养 1.菌株活化及扩大培养 ①制备PDA培养基:去皮马铃薯200 g切成小块,加水约500 mL,煮沸30 min,然后用纱布过滤,滤液加蔗糖20 g,琼脂20 g。溶化后加水定容至1000 mL,分装于250 ml锥形瓶中,121℃灭菌20 min,自然pH。 ②接种:取灭菌后PDA培养基倒平板,冷却后,接种斜面保藏的黑曲霉(Aspergillus niger)菌种,28℃恒温培养3d。 2.摇瓶发酵培养 ①发酵培养基的制备: 玉米粉培养基:玉米粉30g,米糠5g,麸皮5g,加水1000ml,拌匀至无干粉又无结团,分装于250 ml锥形瓶内,每瓶100 ml, 自然pH,121℃灭菌20 min。 ②接种与产酶培养:取培养72h的黑曲霉平板,用打孔器打孔制成菌片。每个锥形瓶中接种12片,28℃振荡培养96 h。 3.离心 将摇床培养4d的黑曲霉发酵液4层纱布过滤后离心(10000r/min,10min)除菌体,所得上清液即为糖化酶粗酶液。

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