1、制备谱图中出现峰分叉,可能有哪些原因,该怎么办?
峰分叉又称为裂峰,有可能是色谱柱以外的色谱条件发生了变化,或者色谱柱本身受损发生了变化。
A、样品浓度较高,上样量较大,导致峰分叉;只需要减少上样量即可。
B、色谱柱柱头被污染引起的峰分叉;使用合适的溶剂冲洗色谱柱。
C、柱压太高致使柱头塌陷引起峰分叉;在柱头端增补填料或者更换新色谱柱。
D、溶解样品的强度比流动相强,溶剂效应引起峰分叉;使用流动相溶解样品即可。
E、固体颗粒堵塞分配器,分配不均匀导致峰分叉;更换柱头端分配器即可。
2、我要单次上样0.5-1g样品,请问我该用什么制备柱?
答:建议使用30*250mm或者50*250mm的制备柱。化药可以按照每100g填料可以上样1g样品的方法进行简单的计算,得到应该使用多大的制备柱或者相应的填料量。多肽样品由于自身的特殊性,纯化同样质量的样品,需要更多的填料。一般认为多肽样品100g填料可以上样0.1g样品。
3、我购买了一根Ultimate XB-C18,5um,21.2*250mm,请问该柱的流速、压力是多少?
答:正常情况下,21.2mm色谱柱的最佳流速20mL/min。我们公司该色谱柱出厂使用甲醇:水=75;25测试,压力为15Mpa。其他型号的制备柱流速可以参考下表。
规格 项目 | 柱管规格 | ||||
4.6x250mm | 10x250mm | 21.2x250mm | 30x250mm | 50x250mm | |
填料量(g) | 2.5 | 11.8 | 53.1 | 106.3 | 295.4 |
放大因子 | 1 | 4.73 | 21.2 | 42.5 | 118 |
上样量(mg) | 0.25-25 | 1.18-118 | 5.31-531 | 10.63-1063 | 29.54-2954 |
流速范围(mL/min) | 0.5-2 | 3-5 | 10-20 | 20-45 | 70-130 |
4、我要装填DAC,请问你们的填料耐压是多大的?会不会导致填料压碎?
答:DAC装填时,为了确保填料不被压碎,需要在填料能够承受的压力范围内装填。月旭色谱填料采用特殊的加工处理工艺,使填料耐压性能更好,有利于DAC的装填。填料的耐压情况参考下表
产品 | 最大使用压力 |
粒径5um色谱填料 | 40Mpa |
粒径10um色谱填料 | 25Mpa |
粒径15um色谱填料 | 15Mpa |
粒径20um色谱填料 | 10Mpa |
粒径20-40um色谱填料 | 5Mpa |
粒径40-70um色谱填料 | 4Mpa |
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