各位小伙伴在实验分析中应该都遇到过这类问题,在液相色谱中,对于组分复杂的样品,采用一种色谱体系,往往很难得到理想的分离效果,要么分离时间太长,要么分离度太差。这种情况,采用梯度洗脱就可以缩短分析时间,提高分离效果。下面和大家分享一则梯度微调实例,一起感受下梯度微调对分离效果的奇妙影响吧。
各位小伙伴在实验分析中应该都遇到过这类问题,在液相色谱中,对于组分复杂的样品,采用一种色谱体系,往往很难得到理想的分离效果,要么分离时间太长,要么分离度太差。这种情况,采用梯度洗脱就可以缩短分析时间,提高分离效果。下面和大家分享一则梯度微调实例,一起感受下梯度微调对分离效果的奇妙影响吧。
项目背景
名称:12种酚类
色谱柱:月旭Ultimate ® AQ-C18 4.6mm*150mm,5μm
流动相A:水 流动相B:乙腈
问题:柱子正常活化进样,基线和整体出峰均不理想,分离度较差。
1.柱子在运输或储存过程中保存液发生变化,导致填料产生微小改变,碳链蜷缩,未舒展开来,对目标物的保留造成影响;
2.仪器系统存在梯度滞后,在梯度变化过程中,两相混合不精准,导致的物质分离问题;
3.目标物受溶剂效应影响;
4.梯度变化过快,流动相的洗脱能力太强,导致色谱峰未达到分离效果。
1.测试梯度滞后体积和比例精确性;
2.用初始流动相0.2流速过夜平衡柱子;
3.样品用初始流动相溶解(慎用,改变样品溶剂后需要验证样品溶液的稳定性);
4.调节梯度,减缓洗脱速率,减小洗脱能力;
基线和峰形大有改善,但是最后一个峰在梯度时间外出峰了。
基线和峰形大有改善,但是最后一个峰在梯度时间外出峰了。
前段分离好的梯度不做调整,调整最后一个物质出峰梯度阶段的有机相比例,增加洗脱能力。
以上说明,项目的成功与否,不仅取决于色谱柱类型,仪器条件,还有方法的建立。其中流动相便是考察重点,流动相梯度洗脱必要时可以充分应用上,他是由几种不同极性的溶剂组成,通过改变流动相中不同时间段各溶剂组成的比例改变流动相极性,使每个流出的组分都有合适的容量因子,并使样品的所有组分在最短时间内实现佳分离。好啦,今天的分享就先到这,希望能对小伙伴们有所启发有所帮助哦。
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