案例分享，手把手教你液相色谱梯度优化

月旭科技（上海）股份有限公司

2020/06/12 09:16

各位小伙伴在实验分析中应该都遇到过这类问题，在液相色谱中，对于组分复杂的样品，采用一种色谱体系，往往很难得到理想的分离效果，要么分离时间太长，要么分离度太差。这种情况，采用梯度洗脱就可以缩短分析时间，提高分离效果。下面和大家分享一则梯度微调实例，一起感受下梯度微调对分离效果的奇妙影响吧。

项目背景

名称：12种酚类

色谱柱：月旭Ultimate ® AQ-C18 4.6mm*150mm,5μm

流动相A：水 流动相B：乙腈

问题：柱子正常活化进样，基线和整体出峰均不理想，分离度较差。

1.柱子在运输或储存过程中保存液发生变化，导致填料产生微小改变，碳链蜷缩，未舒展开来，对目标物的保留造成影响；

2.仪器系统存在梯度滞后，在梯度变化过程中，两相混合不精准，导致的物质分离问题；

3.目标物受溶剂效应影响；

4.梯度变化过快，流动相的洗脱能力太强，导致色谱峰未达到分离效果。

1.测试梯度滞后体积和比例精确性；

2.用初始流动相0.2流速过夜平衡柱子；

3.样品用初始流动相溶解（慎用，改变样品溶剂后需要验证样品溶液的稳定性）；

4.调节梯度，减缓洗脱速率，减小洗脱能力；

基线和峰形大有改善，但是最后一个峰在梯度时间外出峰了。

前段分离好的梯度不做调整，调整最后一个物质出峰梯度阶段的有机相比例，增加洗脱能力。

以上说明，项目的成功与否，不仅取决于色谱柱类型，仪器条件，还有方法的建立。其中流动相便是考察重点，流动相梯度洗脱必要时可以充分应用上，他是由几种不同极性的溶剂组成，通过改变流动相中不同时间段各溶剂组成的比例改变流动相极性，使每个流出的组分都有合适的容量因子，并使样品的所有组分在最短时间内实现佳分离。好啦，今天的分享就先到这，希望能对小伙伴们有所启发有所帮助哦。

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