今天给各位小伙伴们讲讲该如何有效的提高理论塔板数。理论塔板数也称为柱效,是色谱分析中的一个重要参数。各位小伙伴经常会看到药典中规定理论塔板数不低于某一个数值,因为一旦色谱柱理论塔板数低于该数值,就会出现分离度或者拖尾因子达不到要求的情况,所以理论塔板数是我们衡量色谱柱是否还能用于该项目的一个很重要的参考依据。
理论塔板数是色谱柱性能的主要参数,是表示色谱柱对样品的分离能力或是分离效率(简称柱效),常用“N”表示。通常N值越大,柱效越高,分离能力越强,分离效果就越好。
如果色谱峰形对称并符合正态分布,N可近似表示为:
N取决于色谱柱固定相(填料)的种类、性质(粒度、粒径分布等)、填充状况、柱长、柱内径、流动相的种类、流速及测定柱效所用物质的性质。
理论塔板数可以定量柱效率,计算公式如下:
N的大小主要和色谱峰中的两个因数有直接关系,一是保留时间(t单位秒(s)),二是色谱峰宽(w单位厘米(cm)),要想提高色谱峰的分离效果,增加理论塔板数,我们只要从这两个方面做起就足够。
延长样品保留时间方法很多:
1.选择更长的色谱柱;
2.降低色谱柱温度;
3.减小流速(这个尽量不要变,因为流速减小,色谱峰宽也会变宽,同时检测灵敏度也会降低,这样可能会得不偿失);
4.适当降低流动相中有机相的含量(主要针对反相色谱)。
减小色谱峰宽的方法也有很多:
1.减小进样量;
2.减小进样器到检测池之间管路的死体积,尤其是缩短连接管路;
3.采用超高效液相色谱时,采用缩短保留时间的方法也能减小色谱峰宽(这样可能对增加理论塔板数并无帮助)。
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