当心,使用流动相注意这些事了吗

流动相 | 保质期

各位老师知道流动相的保质期有多久吗,经常遇到有老师前来咨询“咱们的流动相能放多久啊,放一星期没事吧”。但是老师,您知道吗,流动相放的时间太长,可是会直接影响您的实验结果呢。在这里就给各位老师说道说道流动相的注意事项。

 

一:流动相的贮存


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流动相 | 保质期

各位老师知道流动相的保质期有多久吗,经常遇到有老师前来咨询“咱们的流动相能放多久啊,放一星期没事吧”。但是老师,您知道吗,流动相放的时间太长,可是会直接影响您的实验结果呢。在这里就给各位老师说道说道流动相的注意事项。

 

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二:流动相放置时间的影响

 

01 有机相挥发:有机试剂组成比例越大,沸点越低,其挥发程度越大,不过对于挥发相对比较好控制,只要密封好就可以;

 

02 pH值影响:反相色谱流动相往往是缓冲盐,其pH值受有机相的挥发、空气中的二氧化碳等影响,有时甚至浑浊;且不同pH值及不同缓冲盐其受影响程度不同;

 

03 微生物影响:水相体系时间久了,往往会致生微生物,特别受光照等影响,因此,往往在棕色瓶中储存;另外,如果流动相中有机相比例越大,其越不容易致生微生物;所以根据储存条件及有机相比例不同其有效期不同。


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所以各位老师要注意了,液相流动相建议12小时以后和瓶子一起更换的,纯有机相建议12小时抽滤,24小时以后带瓶子一起更换流动相溶液最忌微生物超标,各种菌会导致柱子堵,而产生很多不良影响。我们都知道,室温如果高了,纯水相上午配的下午下班时候都有可能会有微生物繁殖,都需要重新过滤。所以,纯水相要现配现用,别抱侥幸心理偷懒不配,结果误差大的话,随时可能让你返工哦。

 

三:流动相使用前要用过滤和脱气

 

流动相使用前用0.45μm滤膜过滤、脱气,清除微粒和灰尘。在送液泵内,为了防止杂物(固体)进入流路,装有吸滤器,但网孔径为10μm,比此更小的颗粒仍然可通过,这会导致流路和柱子堵塞和污染。为此,建议常用0.45μm滤膜过滤。流动相溶剂须经脱气,如不脱气,在溶剂混合时,或压力温度变化时容易产生大量气泡,会导致泵误动作和输液不畅,检测器产生噪声信号等。

 

四:流动相需要恢复到室温下使用

 

流动相恢复到室温后使用。流动相温度与室温相差时,流动相在恢复到室温前,基线水平很难稳定,特别是发生漂移,也容易产生气泡等现象。水与有机溶剂混合时,混合液变化大,往往会与室温相差很大,务必注意。


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五:避免使用带有腐蚀性流动相

 

流动相含有浓硫酸、浓硝酸、二氯乙suan、二氯甲烷、丙酮、四氢呋nan、二甲亚砜等溶剂,会对流路中的PEEK树脂管路强度变差、PEEK树脂管容易破裂使溶剂外溅。流动相含有卤素离子的溶剂,如KCl、NaCI、NH4CI等。对流路中的不锈钢材料有腐蚀作用,以上的溶剂须尽量避免使用。非用不可时,分析完了后,应立刻用蒸馏水把全流路清洗干净。

 

六:在流动相中加入有机试剂后测量pH值

 

所谓的pH值,是基于水为溶剂的体系才叫pH值,所以正确的调节缓冲溶液pH值的做法是在水溶液中进行。如果添加了有机溶剂后再测量pH值,这其实与添加之前测量的pH值会有所不同。

 

然而,最重要的一点是操作习惯要保持一致。如果习惯是在添加有机溶剂之后测量pH值,那只要确保每次的操作都是如此就可以了。虽然这样操作不是100%的准确,但至少它与之前的做法是一致的。这对于一个完整的研究来说,相较之你在添加有机溶剂之前测量pH值而获得了一次准确的数据来说,保持一致的操作方法可能会更重要。

 

七:不要将流动相试剂瓶中的

流动相完全用光

假如流动相准备的不够充足,除了存在一定的泵和色谱柱空运行的风险外,还会有其它的问题存在。如由于溶液中水会从试剂瓶的上方蒸发,所以试剂瓶顶部流动相的成分已经发生了改变。如果使用了瓶中最后这部分试剂,事实上它们就是原来试剂瓶中顶部的那部分,当它们通过色谱柱时可能会有渣滓滞留在色谱柱中。

 

八:使用超声给流动相脱气

超声法对于确保所用的缓冲盐完全溶解很有效,但它不是z有效的脱气方法,而且由于超声时溶液会快速升温而导致流动相中有机试剂蒸发。为了节省时间,可以花5min时间通过真空过滤机来过滤流动相,这可以一步达到脱气和过滤的两个目的。 

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