丝氨酸蛋白酶纯化方案

丝氨酸蛋白酶是一种种类丰富的酶类,之所以以此命名是因为在酶的催化活性位点上包含丝氨酸在内的丝氨酸、组氨酸、天冬氨酸组成的催化三联体。有些丝氨酸蛋白酶类如凝血酶类蛋白酶,其中包括凝血酶、组织纤维蛋白溶酶原激活剂、血纤维蛋白溶酶,它们参与凝血的发生以及炎症应答反应;也有些如胰蛋白酶类的丝氨酸蛋白酶类的参与消化的酶类,包括胰蛋白酶、弹性蛋白酶、胰凝乳蛋白酶;还有一些表达在神经系统中的丝氨酸蛋白酶类,这些酶类与神经系统正常的维持或是介导病理情况的发生。

一、苯甲脒亲和介质


对氨基苯甲脒既是重要的化工原料、药物中间体, 又是胰蛋白酶、尿激酶等酶的抑制剂, 它还可以作为亲和色谱法中的配体和丝氨酸蛋白酶活性位置的探针,因而备受关注。月旭Benzamidine Tanrose 4FF是将对氨基苯甲脒偶联到琼脂糖凝胶上而制成的一种亲和层析介质,可以用来纯化丝氨酸蛋白酶。


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二、Benzamidine Tanrose 4FF

技术参数

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层析柱:PreCot Benzamidine 4FF(5mL预装柱)。

样品:胰糜蛋白酶混合物;

结合缓冲液:50mM PB,50mM NaCl pH7.0;

洗脱缓冲液:0.1M GIy pH 2.7(洗脱液收集管中预先加入200μl 1M Tris-HCl pH9.0);

流速:0.7mL/min。

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