反相高效液相色谱（RP-HPLC）是液相色谱中最常用的模式，广泛应用于化工制药生物工程等领域。RP-HPLC中溶剂系统的选择和优化一直是液相色谱领域的热门研究课题，对于多组分目标物的分析与分离，有效选择并优化色谱溶剂系统仍存在很多问题，本研究考察了溶剂系统的强度，极性等参数对RP-HPLC分离性能的影响。
示例 色谱柱：UItimate® ODS-3 4.6mm×150mm，5μm； 柱温：25℃； 检测器：UV225nm； 流速：1.0mL/min； 进样量：10μL。 流动相A ：0.1%磷酸 B：ACN，A：B=3：7， 色谱柱：Xtimate® 4.6mm×150mm，5μm。
流动相A ：0.1%磷酸 B：ACN，A：B=3：7，
色谱柱 ：UItimate® ODS-3 4.6mm×150mm，5μm。
由图谱判断8.6min峰内夹杂小峰未分开，UItimate® ODS-3 4.6mm×150mm，5μm更适合分离。
考虑不同溶剂洗脱强度不同，有机相中加入甲醇，流动相A ：0.1%磷酸 B：ACN：甲醇=8：2，A：B=3：7。
由图谱判断8.6min峰内夹杂小峰未分开，UItimate® ODS-3 4.6mm×150mm，5μm更适合分离。
考虑不同溶剂洗脱强度不同，有机相中加入甲醇，流动相A ：0.1%磷酸 B：ACN：甲醇=8：2，A：B=3：7。
调整有机溶剂比例后可以得出10.7min和11.9min分离度增加到3.0。
优化方法，流动相A ：0.1%磷酸 B：ACN：甲醇=7：3，A：B=4：6。
从图谱中可以看出将峰分开，分离度增大，适当的调整有机相种类及比例可以提高分离性能。
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