俗话说的好:“磨刀不误砍柴工,工欲善其事,必先利其器”。可以说,色谱柱是色谱分析过程中zui重要的部分,相当于人体的“心脏”。根据自己要分析的样品去选择合适的液相色谱柱,需要考虑不同参数将会造成什么影响。比如色谱柱尺寸:柱长、内径;色谱柱填料:粒径、孔径、比表面积、基质及其表面特征、载碳量键合相类型。
在日常液相分析中,正确选择适合自己实验的色谱柱,将会使得你的实验事半功倍!今天小编就在这里浅谈液相分析中如何选择液相色谱柱。
色谱柱参数--- 柱长
两支同填料的色谱柱,柱长越长,分离时间越长,但柱越长分离度将会更好,同时柱压也将更大,可结合样品的复杂性和希望的分离时间来选择合适的柱长,一般为2.0~250mm。
色谱柱参数--- 内径
窄径柱可提高柱的灵敏度,并可明显降低溶剂的使用量;
宽径柱可以将系统死体积的影响降到zui低,载样量高,抗污染。
色谱柱参数--- 粒径
例如:1.8μm、3μm、5μm、10μm等,粒径越小,分离越快,柱效越高。但柱压力越高,柱容易被污染,寿命低。
色谱柱参数--- 孔径
孔径小,含孔率高,则比表面积大,载碳量高。
色谱柱参数--- 比表面积
例如:180㎡/g、320㎡/g等(Ultimate系列为320㎡/g),选择适合目标物的比表面积,每克填料的表面积(与粒度、含孔率有关),比表面积大,会增加样品与键合相之间的反应,增加保留、载样量增加,比表面积小可以缩短分析时间和梯度时的平衡时间。
色谱柱参数--- 载碳量
例如:10%、14%、17%、23%等,载碳量通常影响选择性。硅胶表面键合相的比例,与比表面积,键合覆盖度等有关。载碳量高,则保留增加,适合分析非极性化合物。制备色谱的上样量也可以增加。
色谱柱参数--- 硅胶基质
1. 硅胶基质色谱柱较其他材料制成的柱子有更高的柱效;
2. 硅胶机械强度好;
3. 硅胶表面可化学修饰制成具有各种官能团的键合相;
4. 硅胶填料不会发生体积的变化;
5. 硅胶在高pH值下会溶解;
6. 硅胶表面酸性,在分离碱性化合物时容易产生拖尾。
色谱柱参数--- 聚合物基质填料
1. 交联苯乙烯/二乙烯基苯、甲基苯烯酸酯等;
2. pH稳定性好:pH1-14;
3. 可以在很宽的范围内进行表面化学处理以满足反相色谱、离子交换色谱、疏水作用色谱和体积排阻色谱的需求;
4. 在中等pH条件下对强碱性物质具有更好的峰形;
5. 填料的体积随着流动相的不同而改变,如膨胀或收缩;
6. 分离效率相对硅胶而言比较低;
7. 重现性不好;
8. 机械强度差。
色谱柱参数 --- 硅醇基
硅醇基的酸性较大,可与碱性化合物由于静电作用力而牢固的结合,因此含有较多残留硅醇基的填料在分离碱性化合物时容易产生拖尾、变宽、保留延长等现象。
如何屏蔽剩余硅羟基的影响:加入适当的扫尾剂如三乙胺可以掩蔽残留的硅羟基,使碱性化合物峰形变好;降低流动相pH值小于3,可以减小硅醇基的反应,从而减小拖尾现象。或者选择优先使用双封尾的色谱柱。
色谱柱参数 --- 封尾
为了降低硅醇基的影响,需要对色谱柱进行封尾,通常为键合填料与小硅烷(如:三甲基硅烷)进行后续反应,屏蔽掉部分残留硅醇基。
封尾的目的:1.屏蔽残留的硅醇基;2.改善选择性。
色谱柱参数 --- 键合相的分类
键合相:反相(70%);C18(65%);C8(15%);Cyano(5%);苯基柱(<5%);正相(20%;硅胶、-NH2、-CN);其它(10% ;手性柱、离子交换柱)。
同一厂家相同硅胶基质的反相柱:保留值随着碳载量的增加而增加;键合碳链越长,保留越大,C18≈C8>C4>C1,长链之间差异不大,根据待分析物质的性质,选择合适的键合相和分离模式。
【直播有礼】高效液相色谱工艺放大:从分析到制备纯化
第九届色谱网络会议,共探色谱分离材料最新进展
电商秒杀,再度来袭!月旭UHPLC色谱柱钜惠,历史最低
秉承奥运精神,强健体魄!月旭销售部24年首期健身活动圆满成功
相关产品
关注
拨打电话
留言咨询